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发布时间：2026/10/15 17:22:02 阅读次数：16
植物山梨醇氧化酶（sorbital oxidase）活性比色法定量检测试剂盒产品说明书
主要用途
植物山梨醇氧化酶（sorbital oxidase）活性比色法定量检测试剂是一种旨在通过山梨醇氧化酶和过氧化物酶的双酶反应体系中，山梨醇氧化产生的过氧化氢，与显色染料邻联茴香胺发生反应，在分光光度仪下，产生吸光峰值的变化，即采用比色法测定样品中山梨醇氧化酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种植物组织，包括种子（seed）、叶片（leaf）、根（root）、胚胎叶（cotyledon）、上胚轴（epicotyl）等山梨醇氧化酶的活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
山梨醇氧化酶（sorbital oxidase）为山梨醇代谢的酶蛋白，其分子量为54kd，在未成熟的植物果实中高度表达，随着果实膨大而逐渐下降。山梨醇是一种环状多元醇（cyclic polyols），具有调节果味的作用。基于底物山梨醇（sorbitol），在山梨醇氧化酶的催化下，氧化产生过氧化氢，在过氧化物酶（peroxidase）的作用下，使显色染料还原型邻联茴香胺（reduced o-dianisidine）转化为氧化型邻联茴香胺（oxidized o-dianisidine），在分光光度仪（500nm 波长）下，呈现吸光峰值的变化，来检测样品中山梨醇氧化酶的活性。其反应系统为：
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
裂解液（Reagent B） 毫升
缓冲液（Reagent C） 毫升
反应液（Reagent D） 毫升
底物液（Reagent E） 毫升
催化液（Reagent F） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存清理液（Reagent A）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；反应液（Reagent D）避免光照；有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
15毫升锥形离心管：用于反应液配制的容器
DOUNCE匀浆器：用于裂解组织细胞
微型台式离心机：用于样品制备
氧气罐：用于试剂充氧
比色皿：用于比色的容器
分光光度仪：用于比色分析
实验步骤
一、 样品准备
1． 准备好新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等），并秤重以确定1克组织重量
2． （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管
3． （选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次
4． 即刻用刀片切碎组织
5． 放进一个预冷的15毫升锥形离心管
6． 加入预冷的xx毫升裂解液（Reagent B）
7． 涡旋震荡5秒，充分混匀
8． 即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约80下）
9． 将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管，放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为5000g（或7500RPM，例如eppendorf 5415）
10． 小心移出上清液（注意：不要触碰沉淀物）到另一个新的预冷的15毫升锥形离心管
11． （选择步骤）如果上清液含有肉眼可见的残渣，重复离心5分钟一次，速度为5000g（或7500RPM，例如eppendorf 5415）
12． 即刻移入到1.5毫升离心管
13． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 BCA蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30031.1）
14． 放进－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用
二、 测读准备
1． 准备好上述制备的样品，置于冰槽里融化
2． 设定好分光光度仪：波长500nm，间隔1分钟，读数6次（共5分钟），并置零或设置0分钟和5分钟各测读1次
3． 检测开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的试剂置入冰槽里融化，然后移出xx毫升缓冲液（Reagent C）到新的15毫升离心管，加入xx微升反应液（Reagent D）和xx毫升底物液（Reagent E），充分混匀后，标记为反应工作液，置于冰槽里，避免光照。
4． （选择步骤）接上氧气进行充氧5分钟后使用（注意：参见注意事项4）
三、 背景对照测定
1． 移取xx毫升反应工作液到新的3毫升比色皿
2． 加入xx微升催化液（Reagent F）
3． 室温下孵育3分钟
4． 加入xx微升缓冲液（Reagent C）
5． 上下倾倒数次，混匀
6． 即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照（5分钟读数－0分钟读数）
四、 样品测定
1． 移取xx毫升反应工作液到新的3毫升比色皿
2． 加入xx微升催化液（Reagent F）
3． 室温下孵育3分钟
4． 加入100微升待测样品（注意：50微克总蛋白；样品须溶解）
5． 上下倾倒数次，混匀
6． 即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数（5分钟读数－0分钟读数）
五、计算样品活性
注意事项
1． 本产品为20次操作，包括背景对照
2． 操作时，须戴手套；反应液（Reagent D）具有毒性，注意操作安全
3． 每增加1个样品，增加反应工作液为：缓冲液（Reagent C）2毫升＋反应液（Reagent D）300微升＋底物液（Reagent E）500微升，以此类推。配制反应工作液时，须根据样本数量配制实际工作液容量
4． 反应工作液配制后，可以接上氧气进行充氧5分钟后使用，充氧与未充氧的酶活性关系为：充氧酶活性X 0.6＝未充氧酶活性；注意显示数据时指明为充氧或未充氧状态
5． 系统操作过程中，背景测定只需1次
6． 加样后3秒内进行比色测定
7． 比色测定后，比色皿须清洗彻底
8． 样本测定5分钟读数高于0分钟读数表明具有酶活性；如果计算酶动力学，选择线性段单位时间的差值
9． 建议待测样本总蛋白为50至100微克/100微升；如果样本酶活性过低或过高，则可以增加或降低样本量；注意计算公式的调整（本公司提供 BCA蛋白质浓度定量试剂盒G&VS30031.1）
10． 山梨醇氧化酶活性单位浓度定义：在25℃室温下，pH 7.0的情况下，每单位酶在单位时间内（每分钟）氧化1微摩尔的山梨醇为葡萄糖和过氧化氢
11． 如果样本酶活性过低或过高，则可以增加或降低样本量
12． 本公司提供系列酶学检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组份订购信息
编号 名称 规格
G&VS16046 植物山梨醇氧化酶活性比色法定量检测试剂盒 20次
G&VS16046A 清理液（Reagent A） 毫升
G&VS16046B 裂解液（Reagent B） 毫升
G&VS16046C 缓冲液（Reagent C） 毫升
G&VS16046D 反应液（Reagent D） 毫升
G&VS16046E 底物液（Reagent E） 毫升
G&VS16046F 催化液（Reagent F） 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS16046 | 植物山梨醇氧化酶（sorbital oxidase）活性比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS16047 | 植物山梨醇脱氢酶sorbital dehydrogenase）活性光度法定量检测试剂盒 | 20次 |
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