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植物中性/碱性蔗糖转化酶（neutral invertase）活性DNS比色法定量检测试剂盒产品说明书

发布时间：2026/10/15 17:26:10 阅读次数：17

植物中性/碱性蔗糖转化酶（neutral invertase）活性DNS比色法定量检测试剂盒

产品说明书

主要用途

植物中性/碱性蔗糖转化酶（neutral invertase）活性DNS比色法定量检测试剂是一种旨在使用具有还原力的黄色3,5-二硝基水杨酸与受到中性/碱性蔗糖转化酶中性或碱性环境下水解产生的还原基团分子反应，生成强烈吸光的3-氨基-5-硝基水杨酸，即采用比色法测定其还原后峰值的升高变化，以此测定样品中性/碱性蔗糖转化酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种新鲜植物组织，包括叶片（leaf）、谷粒（grain）、种子（seed）等裂解萃取液样品中性/碱性蔗糖转化酶的活性检测。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。

技术背景

蔗糖转化酶（invertase），是碳水化合物代谢的主要酶之一。蔗糖，一种非还原性二糖，是碳和能量的来源。蔗糖代谢为植物生长和发育的基本代谢活动：提供代谢能量、修复损伤、保持健康。蔗糖转化酶主要调节蔗糖的代谢通路入口，控制细胞分化和植物发育。蔗糖转化酶分为酸性和中性（碱性）两种亚酶；其中酸性蔗糖酶（acid invertase）分为可溶性和不可溶性。酸性蔗糖酶（EC3.2.1.26），又称为β-呋喃果糖苷酶（β-Fructofuranosidase），是糖基化蛋白（N-glycosylated protein），55至70Kd，pH为3.5至5.5，主要在植物、真菌、酵母和细菌中，存在于不成熟组织中，通过切离果糖上氧-碳键，催化蔗糖不可逆性水解为葡糖糖和果糖，控制蔗糖降解、移位、储存，韧皮部卸出（phloem unloading），提供细胞呼吸的燃料和化合物合成所需的碳和能量。可溶性酸性蔗糖酶位于囊泡内（vacuole），具有调节细胞渗透压和组织膨胀压力（turgor pressure）、细胞延长、蔗糖进入、糖成分和糖信号等功能，而不可溶性位于细胞壁（通过离子结合方式结合细胞壁），即繁殖结构体中，存在于快速生长的组织中，与植物细胞分化、生长、发育有关。酸性蔗糖酶对于植物激素（例如植物生长素auxin、细胞分裂素cytokinin等）、糖、病原体、氧气、创伤、环境刺激等敏感。活性与蔗糖水平成负相关。中性或碱性蔗糖酶（neutral or alkaline invertase；EC3.2.1.153）是非糖基化蛋白，pH在7.0至8.0，主要在光合成生物体内（例如植物和藻类菌），且在所有植物组织中存在，尤其在成熟组织内，位于胞浆、叶绿体、线粒体、质体中，54至65Kd，为四聚体或八聚体结构，非常不稳定，容易失活。其具有氧化应激防御功能，清除过氧化氢，维持活性氧动态平衡，促进植物节间成熟，与体细胞胚胎生成相关。蔗糖转化酶突变异常，会导致植物组织早期退化。基于底物蔗糖，在中性/碱性环境下，通过中性/碱性蔗糖转化酶的水解，释放出葡萄糖等含有游离的还原性基团（例如酮基等），进一步使用具有还原力的黄色3,5-二硝基水杨酸（3,5-Dinitrosalicylic acid；DNS）与之反应，产生红棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸（3-amino-5-nitrosalicylic acid），在分光光度仪（540nm波长）下测定，以定量分析中性/碱性蔗糖转化酶的活性。其反应方式为：

产品内容

清理液（Reagent A）毫升

裂解液（Reagent B）毫升

缓冲液（Reagent C）毫升

反应液（Reagent D）毫升

底物液A（Reagent E）毫升

底物液B（Reagent F）毫升

补充液（Reagent G）毫升

标准液（Reagent H）毫升

产品说明书 1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；底物液B（Reagent F），避免光照，有效保证6月

用户自备

15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

1.5毫升离心管：用于样品操作的容器

2.2毫升离心管：用于配制标准样品的容器

DOUNCE匀浆器：用于裂解组织

尼龙网（nylon mesh）：用于去除残渣

4℃（微型）台式离心机：用于样品处理

沸水装置：用于反应物孵育

比色皿：用于比色测定的容器

分光光度仪：用于比色分析

实验步骤

一、样品准备

1．准备好新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等），并秤重以确定1克组织重量

2．（选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管

3．（选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次

4．移入到一个液氮冻存管

5．即刻放进液氮罐过夜

6．次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎组织成粉末（注意：切莫使组织冻融）

7．放进一个15毫升锥形离心管

8．加入预冷的xx毫升裂解液A（Reagent B1）

9．涡旋震荡5秒，充分混匀

10．即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器

11．置于冰槽里用研磨棒匀化组织（约80下）

12．准备1个小型漏斗，内衬尼龙丝或150微米的尼龙网（nylon mesh），置于15毫升锥形离心管上

13．将所有组织匀浆物移入到小型漏斗里过滤

14．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为10000g

15．小心移取上清液分装到预冷的1.5毫升离心管

16．移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）

17．即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作

二、测定准备

1．从-70℃取出待测样品（例如植物组织裂解悬液样品等），置于冰槽里

2．设定好分光光度仪（温度为25℃）：波长为540nm，并置零

3． 缓冲液（Reagent C）室温下均衡温度

4．测定开始前，移出xx微升底物液B（Reagent F）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升底物液A（Reagent E），混匀后，置于冰槽里，标记为底物工作液（2次操作），放在暗室里备用。然后进行下列操作

三、 标准样品测定

1．准备好5个2.2毫升离心管，标记为1至5号管

2．分别加入xx毫升缓冲液（Reagent C）到1至5号管

3．移取xx毫升标准液（Reagent H）到1号管，混匀

4．小心移取xx毫升1号管稀释的标准液（Reagent H）到2号管，混匀

5．小心移取xx毫升2号管稀释的标准液（Reagent H）到3号管，混匀

6．小心移取xx毫升3号管稀释的标准液（Reagent H）到4号管，混匀

7．将1至5号管放进冰槽里备用；标准管浓度见下表

管号	缓冲液（Reagent C）	标准液（Reagent H）	标准葡萄糖浓度
1	x x毫升	xx毫升	xx毫摩尔/升
2	xx毫升	xx毫升1号管	xx毫摩尔/升
3	xx毫升	xx毫升2号管	xx毫摩尔/升
4	xx毫升	xx毫升3号管	xx毫摩尔/升
5	xx毫升	0	0

8．分别移取xx微升上述配制的系列标准液（Reagent H）到1.5毫升离心管

9．分别加入xx微升上述配制的底物工作液

10．在沸水里孵育5分钟，避免光照

11．在室温下静置15分钟冷却，避免光照

12．分别移取100微升上述反应液到新的比色皿

13．分别加入xx毫升补充液（Reagent G），混匀

14．即刻放进分光光度仪检测：获得吸光读数

15．重复实验步骤8至14四次

16．构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光单位；横座标（X轴）为标准葡萄糖浓度（毫摩尔/升）

四、样品和背景测定

1．移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的1.5毫升离心管

2．加入xx微升待测样品（100微克裂解萃取蛋白）或补充液（Reagent G）

3． 25℃温度下，孵育3分钟

4．分别加入xx微升反应液（Reagent D），混匀

5． 25℃温度下，孵育3分钟

6．分别加入xx微升上述配制的底物工作液

7．在沸水里孵育5分钟，避免光照

8．在室温下静置15分钟冷却，避免光照

9．分别移取100微升上述反应液到新的比色皿

10．分别加入xx毫升补充液（Reagent G），混匀

11．即刻放进分光光度仪检测：获得吸光读数

12．实际样品吸光读数：样品吸光读数－背景吸光读数

13．根据标准曲线获得样品对应葡萄糖浓度（毫摩尔/升）

14．测算样品酶活性：

注意事项

1．本产品为25次操作，包括标准样品测定

2．操作时，须戴手套

3．底物工作液注意避光

4．样品检测前，须溶解和澄清

5．比色测定后，比色皿须清洗彻底

6．测定值由低到高变化，表明有酶活性

7．建议待测样本蛋白浓度为100微克/50微升；如果样本酶活性过低，则可以增加样本量（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒G&VS30030.1）

8．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度

9．酸性蔗糖转化酶总活性单位浓度定义：在30℃温度下，pH 7.5的情况下，每单位酶在单位时间内（每分钟）释放1微摩尔的葡萄糖分子

10．本公司提供系列植物酶学分析技术产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定检测准确

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组份订购信息

编号名称规格

G&VS16027 植物中性/碱性蔗糖转化酶活性DNS比色法定量检测试剂盒 20次

G&VS16027A 清理液（Reagent A）毫升

G&VS16027B 裂解液（Reagent B）毫升

G&VS16027C 缓冲液（Reagent C）毫升

G&VS16027D 反应液（Reagent D）毫升

G&VS16027E 底物液A（Reagent E）毫升

G&VS16027F 底物液B（Reagent F）毫升

G&VS16027G 补充液（Reagent G）毫升

G&VS16027H 标准液（Reagent H）毫升

G&VS30030.1 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒 100次

试剂盒订购信息

产品编号	名称	规格
G&VS16026.1	植物酸性蔗糖转化酶（acid invertase）总活性DNS比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS16026.2	植物可溶性酸性蔗糖转化酶（acid invertase）活性DNS比色法定量检测试剂盒（液泡）	20次
G&VS16026.3	植物细胞壁不可溶性酸性蔗糖转化酶（acid invertase）活性DNS比色法定量检测试剂盒（胞壁）	20次
G&VS16027	植物中性/碱性蔗糖转化酶（neutral invertase）活性DNS比色法定量检测试剂盒（胞质）	20次
G&VS16044.1	植物酸性蔗糖转化酶（acid invertase）总活性酶连续反应光度法定量检测试剂盒	20次
G&VS16044.2	植物可溶性酸性蔗糖转化酶（acid invertase）活性酶连续反应光度法定量检测试剂盒（液泡）	20次
G&VS16044.3	植物细胞壁不可溶性酸性蔗糖转化酶（acid invertase）活性酶连续反应光度法定量检测试剂盒（胞壁）	20次
G&VS16045	植物中性/碱性蔗糖转化酶（neutral invertase）活性酶连续反应光度法定量检测试剂盒（胞质）	20次