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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

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植物细胞壁不可溶性酸性蔗糖转化酶（acid invertase）活性DNS比色法定量检测试剂盒产品说明书

发布时间：2026/10/15 17:27:26 阅读次数：13

植物细胞壁不可溶性酸性蔗糖转化酶（acid invertase）活性DNS比色法定量检测试剂盒产品说明书

主要用途

植物细胞壁不可溶性酸性蔗糖转化酶（acid invertase）活性DNS比色法定量检测试剂是一种旨在使用具有还原力的黄色3,5-二硝基水杨酸与受到酸性蔗糖转化酶酸性环境下水解产生的还原基团分子反应，生成强烈吸光的3-氨基-5-硝基水杨酸，即采用比色法测定其还原后峰值的升高变化，以此测定样品中细胞壁不可溶性酸性蔗糖转化酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种新鲜植物组织，包括叶片（leaf）、谷粒（grain）、种子（seed）等细胞壁裂解萃取液样品不可溶性酸性蔗糖转化酶的活性检测。产品不含污染性蛋白酶，严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，反应优化，检测敏感。

技术背景

蔗糖转化酶（invertase），是碳水化合物代谢的主要酶之一。蔗糖，一种非还原性二糖，是碳和能量的来源。蔗糖代谢为植物生长和发育的基本代谢活动：提供代谢能量、修复损伤、保持健康。蔗糖转化酶主要调节蔗糖的代谢通路入口，控制细胞分化和植物发育。蔗糖转化酶分为酸性和中性（碱性）两种亚酶；其中酸性蔗糖酶（acid invertase）分为可溶性和不可溶性。酸性蔗糖酶（EC3.2.1.26），又称为β-呋喃果糖苷酶（β-Fructofuranosidase），是糖基化蛋白（N-glycosylated protein），55至70Kd，pH为3.5至5.5，主要在植物、真菌、酵母和细菌中，存在于不成熟组织中，通过切离果糖上氧-碳键，催化蔗糖不可逆性水解为葡糖糖和果糖，控制蔗糖降解、移位、储存，韧皮部卸出（phloem unloading），提供细胞呼吸的燃料和化合物合成所需的碳和能量。可溶性酸性蔗糖酶位于囊泡内（vacuole），具有调节细胞渗透压和组织膨胀压力（turgor pressure）、细胞延长、蔗糖进入、糖成分和糖信号等功能，而不可溶性位于细胞壁（通过离子结合方式结合细胞壁），即繁殖结构体中，存在于快速生长的组织中，与植物细胞分化、生长、发育有关。酸性蔗糖酶对于植物激素（例如植物生长素auxin、细胞分裂素cytokinin等）、糖、病原体、氧气、创伤、环境刺激等敏感。活性与蔗糖水平成负相关。中性或碱性蔗糖酶（neutral or alkaline invertase；EC3.2.1.153）是非糖基化蛋白，pH在7.0至8.0，主要在光合成生物体内（例如植物和藻类菌），且在所有植物组织中存在，尤其在成熟组织内，位于胞浆、叶绿体、线粒体、质体中，54至65Kd，为四聚体或八聚体结构，非常不稳定，容易失活。其具有氧化应激防御功能，清除过氧化氢，维持活性氧动态平衡，促进植物节间成熟，与体细胞胚胎生成相关。蔗糖转化酶突变异常，会导致植物组织早期退化。基于底物蔗糖，在酸性环境下，通过细胞壁不可溶性酸性蔗糖转化酶的水解，释放出葡萄糖等含有游离的还原性基团（例如酮基等），进一步使用具有还原力的黄色3,5-二硝基水杨酸（3,5-Dinitrosalicylic acid；DNS）与之反应，产生红棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸（3-amino-5-nitrosalicylic acid），在分光光度仪（540nm波长）下测定，以定量分析细胞壁不可溶性酸性蔗糖转化酶的活性。其反应方式为：

产品内容

清理液（Reagent A）毫升

裂解液A（Reagent B1）毫升

裂解液B（Reagent B2）毫升

缓冲液（Reagent C）毫升

反应液（Reagent D）毫升

底物液A（Reagent E）毫升

底物液B（Reagent F）毫升

补充液（Reagent G）毫升

标准液（Reagent H）毫升

产品说明书 1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；底物液B（Reagent F），避免光照，有效保证6月

用户自备

15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

1.5毫升离心管：用于样品操作的容器

2.2毫升离心管：用于配制标准样品的容器

DOUNCE匀浆器：用于裂解组织

尼龙网（nylon mesh）：用于去除残渣

4℃（微型）台式离心机：用于样品处理

沸水装置：用于反应物孵育

比色皿：用于比色测定的容器

分光光度仪：用于比色分析

实验步骤

一、样品准备

1．准备好新鲜的植物组织（叶片、谷粒、种子等），并秤重以确定1克组织重量

2．（选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管

3．（选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent A）清洗1次

4．移入到一个液氮冻存管

5．即刻放进液氮罐过夜

6．次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎组织成粉末（注意：切莫使组织冻融）

7．放进一个15毫升锥形离心管

8．加入预冷的xx毫升裂解液A（Reagent B1）

9．涡旋震荡5秒，充分混匀

10．即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器

11．置于冰槽里用研磨棒匀化组织（约80下）

12．准备1个小型漏斗，内衬尼龙丝或150微米的尼龙网（nylon mesh），置于15毫升锥形离心管上

13．将所有组织匀浆物移入到小型漏斗里过滤

14．放进4℃台式离心机离心10分钟，速度为10000g

15．小心抽去上清液

16．加入xx毫升裂解液B（Reagent B2）到沉淀颗粒群里，混匀

17．移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）

18．即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作

二、测定准备

1．从-70℃取出待测样品（例如植物组织裂解悬液样品等），置于冰槽里

2．设定好分光光度仪（温度为25℃）：波长为540nm，并置零

3． 缓冲液（Reagent C）室温下均衡温度

4．测定开始前，移出xx微升底物液B（Reagent F）到新的1.5毫升离心管，加入xx微升底物液A（Reagent E），混匀后，置于冰槽里，标记为底物工作液（2次操作），放在暗室里备用。然后进行下列操作

三、 标准样品测定

1．准备好5个2.2毫升离心管，标记为1至5号管

2．分别加入xx毫升缓冲液（Reagent C）到1至5号管

3．移取xx毫升标准液（Reagent H）到1号管，混匀

4．小心移取xx毫升1号管稀释的标准液（Reagent H）到2号管，混匀

5．小心移取xx毫升2号管稀释的标准液（Reagent H）到3号管，混匀

6．小心移xx毫升3号管稀释的标准液（Reagent H）到4号管，混匀

7．将1至5号管放进冰槽里备用；标准管浓度见下表

管号	缓冲液（Reagent C）	标准液（Reagent H）	标准葡萄糖浓度
1	xx毫升	xx毫升	xx毫摩尔/升
2	xx毫升	xx毫升1号管	xx毫摩尔/升
3	xx毫升	xx毫升2号管	xx毫摩尔/升
4	xx毫升	xx毫升3号管	xx毫摩尔/升
5	xx毫升	0	0

8．分别移取xx微升上述配制的系列标准液（Reagent H）到1.5毫升离心管

9．分别加入xx微升上述配制的底物工作液

10．在沸水里孵育5分钟，避免光照

11．在室温下静置15分钟冷却，避免光照

12．分别移取100微升上述反应液到新的比色皿

13．分别加入xx毫升补充液（Reagent G），混匀

14．即刻放进分光光度仪检测：获得吸光读数

15．重复实验步骤8至14四次

16．构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光单位；横座标（X轴）为标准葡萄糖浓度（毫摩尔/升）

四、样品和背景测定

1．移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的1.5毫升离心管

2．加入50微升待测样品（100微克不可溶性裂解萃取蛋白）或补充液（Reagent G）

3． 25℃温度下，孵育3分钟

4．分别加入xx微升反应液（Reagent D），混匀

5． 25℃温度下，孵育3分钟

6．分别加入xx微升上述配制的底物工作液

7．在沸水里孵育5分钟，避免光照

8．在室温下静置15分钟冷却，避免光照

9．分别移取100微升上述反应液到新的比色皿

10．分别加入xx毫升补充液（Reagent G），混匀

11．即刻放进分光光度仪检测：获得吸光读数

12．实际样品吸光读数：样品吸光读数－背景吸光读数

13．根据标准曲线获得样品对应葡萄糖浓度（毫摩尔/升）

14．测算样品酶活性：

注意事项

1．本产品为25次操作，包括标准样品测定

2．操作时，须戴手套

3．底物工作液注意避光

4．样品检测前，须溶解和澄清

5．比色测定后，比色皿须清洗彻底

6．测定值由低到高变化，表明有酶活性

7．建议待测样本蛋白浓度为100微克/50微升；如果样本酶活性过低，则可以增加样本量（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒G&VS30030.1）

8．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度

9．细胞壁不可溶性酸性蔗糖转化酶活性单位浓度定义：在30℃温度下，pH 4.5的情况下，每单位酶在单位时间内（每分钟）释放1微摩尔的葡萄糖分子

10．本公司提供系列植物酶学分析技术产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定检测准确

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组份订购信息

编号名称规格

G&VS16026.3 植物细胞壁不可溶性酸性蔗糖转化酶活性DNS比色法定量检测试剂盒 20次

G&VS16026.3A 清理液（Reagent A）毫升

G&VS16026.3B 裂解液A（Reagent B1）毫升

G&VS16026.3C 裂解液B（Reagent B2）毫升

G&VS16026.3D 缓冲液（Reagent C）毫升

G&VS16026.3E 反应液（Reagent D）毫升

G&VS16026.3F 底物液A（Reagent E）毫升

G&VS16026.3G 底物液B（Reagent F）毫升

G&VS16026.3H 补充液（Reagent G）毫升

G&VS16026.3I 标准液（Reagent H）毫升

G&VS30030.1 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒 100次

试剂盒订购信息

产品编号	名称	规格
G&VS16026.1	植物酸性蔗糖转化酶（acid invertase）总活性DNS比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS16026.2	植物可溶性酸性蔗糖转化酶（acid invertase）活性DNS比色法定量检测试剂盒（液泡）	20次
G&VS16026.3	植物细胞壁不可溶性酸性蔗糖转化酶（acid invertase）活性DNS比色法定量检测试剂盒（胞壁）	20次
G&VS16027	植物中性/碱性蔗糖转化酶（neutral invertase）活性DNS比色法定量检测试剂盒（胞质）	20次
G&VS16044.1	植物酸性蔗糖转化酶（acid invertase）总活性酶连续反应光度法定量检测试剂盒	20次
G&VS16044.2	植物可溶性酸性蔗糖转化酶（acid invertase）活性酶连续反应光度法定量检测试剂盒（液泡）	20次
G&VS16044.3	植物细胞壁不可溶性酸性蔗糖转化酶（acid invertase）活性酶连续反应光度法定量检测试剂盒（胞壁）	20次
G&VS16045	植物中性/碱性蔗糖转化酶（neutral invertase）活性酶连续反应光度法定量检测试剂盒（胞质）	20次