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发布时间:2026/11/4 11:29:39 阅读次数:3
通用型总淀粉+直链+支链淀粉比色法定量检测试剂盒产品说明书
主要用途
通用型总淀粉+直链+支链淀粉比色法定量检测试剂是一种旨在通过乙醇去脂、伴刀豆球蛋白 A 分离等处理后,由淀粉葡糖苷酶和α-淀粉酶水解直链淀粉成葡萄糖,在葡萄糖氧化酶和过氧化物酶的双 酶反应系统下,测定样品中的水解产物葡萄糖转化过程中,有色醌亚胺的吸光峰值的变化,即采用比色法 测算样品中总淀粉+直链+支链淀粉含量的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功 实验证明的。其适用于各种植物淀粉、包括谷类、面粉、食物等样品中总淀粉+直链+支链淀粉的检测。产 品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定。
技术背景
淀粉(starch),又称为amylum,是多聚糖碳水化合物,由大量的葡萄糖单位通过糖苷键(glycosidic bond) 连接而成。分子式为(C6H10O5)n 。所有绿色植物产生淀粉,作为能源储备,也是人类的主要食物来源。淀 粉在显微镜下, 根据其形态、大小、晶体结构、光极性等特征, 可以分成各种淀粉粒型(starch granule type) 。 淀粉分成两类:直链淀粉(amylose)和支链淀粉(amylopectin)。直链淀粉以α 1,4-线性链接的多聚体, 占植物淀粉的25%,而支链淀粉以α 1,6-侧枝链接的α 1,4-多聚体,占75%,例如糖原的形式是支链淀粉。 直链淀粉(amylose) 是谷类淀粉(cereal starch) 的重要质量参数。在加工过程中, 谷类淀粉胶状化和溶解 性、以及水稻的烹饪和结构特征取决于直链淀粉的含量。支链淀粉是α-D-吡喃糖基单元通过1-4或1-6糖苷 键连接的聚合物,分子量大,结构复杂,可以分成A、B、C型。支链淀粉具有糊化、凝胶特性和抗老化能 力。运用替代碘试法的葡萄糖氧化酶和过氧化物酶偶联反应技术,避免其不确定性的缺陷,通过伴刀豆球 蛋白A (Con A) 与支链多糖结合, 分离出纯化的直链淀粉, 经过淀粉葡糖苷酶(amyloglucosidase) 和α- 淀粉酶(α-amylase)共同作用水解为葡萄糖,葡萄糖氧化酶(glucose oxidase)氧化葡萄糖为葡萄糖酸 (gluconate) 和过氧化氢, 与4-氨基安替比林(4-aminoantipyrine; 4-AA) 反应, 过氧化物酶(peroxidase) 帮助生成红色的有色醌亚胺(quinoneimine dye),在分光光度仪(510nm 波长) 下, 获得吸光峰值的变化, 来分析样品中总淀粉、直链淀粉和支链淀粉的含量,其反应方式为:
| 产品内容 |
|
| 融化液(Reagent A) | 毫升 |
| 去脂液(Reagent B) | 毫升 |
| 清理液(Reagent C) | 毫升 |
| 结合液(Reagent D) | 毫升 |
| 酸性液(Reagent E) | 毫升 |
| 酶解液(Reagent F) | 毫升 |
| 缓冲液(Reagent G) | 毫升 |
| 催化液(Reagent H) | 毫升 |
| 标准液(Reagent I) | 微升 |
| 产品说明书 | 1 份 |
保存方式
保存 清理液(Reagent C)、结合液(Reagent D)、酶解液(Reagent F)和 催化液(Reagent H) 在-20℃冰箱里, 其余的保存在 4℃冰箱里; 缓冲液(Reagent G)、 催化液(Reagent H)和 标准液(Reagent I)避免光照;有效保证 6 月
用户自备
1.5 毫升离心管:用于标准样品处理和检测反应操作的容器
2 毫升离心管:用于直链淀粉样品处理的容器
15 毫升锥形离心管:用于样品处理的容器
50 毫升锥形离心管:用于样品预处理的容器
电热炉:用于样品煮沸处理
涡旋震荡仪:用于样本混匀
(微型)台式离心机:用于样品沉淀
恒温水槽或培养箱:用于样品反应孵育
比色皿:用于比色的容器
分光光度仪:用于比色分析
实验步骤
实验开始前, 将-20℃冰箱里的试剂盒中的试剂置入冰槽里融化, 催化液(Reagent H) 避免光 照。同时设定好分光光度仪:波长 510nm ,并置零。然后进行下列操作。
一、 淀粉样品分离制备
1 . 精确秤取 25 毫克淀粉样品到 15 毫升锥形离心管
2 . 加入 毫升 融化液(Reagent A)
3 . 温和涡旋震荡 1 分钟
4 . 煮沸 15 分钟, 其间每隔 3 分钟强力涡旋震荡 15 秒(注意:确保内容物均匀分布)
5 . 室温下,静置 5 分钟
6 . 加入 毫升 去脂液(Reagent B)
7 . 强力涡旋震荡 1 分钟
8 . 加入 毫升 去脂液(Reagent B)
9 . 上下倾倒混匀数次
10.室温下,静置 30 分钟(注意: 可见沉淀出现)
11.放进台式离心机离心 5 分钟,速度为 2000g
12.小心抽去上清液
13.空气中晾干
14.加入 毫升 融化液(Reagent A)
15.温和涡旋震荡 1 分钟
16.煮沸 15 分钟, 其间每隔 3 分钟强力涡旋震荡 15 秒(注意:确保内容物均匀分布)
17.即刻加入 毫升 清理液(Reagent C)
18.温和涡旋震荡 1 分钟
19.转移到 50 毫升锥形离心管
20.加入 毫升 清理液(Reagent C) 清洗 15 毫升锥形离心管
21.转移清洗残留物合并到上述 50 毫升锥形离心管
22.重复实验步骤 20 至 21 一次
23.加入 毫升 清理液(Reagent C),混匀(注意:总共25 毫升成为1 毫克/毫升样品;作 为直链淀粉和总淀粉样品制备的预处理;须即刻使用,不能保存)
24.继续按照下列操作制备直链淀粉(操作一)和总淀粉(操作二)
操作一:直链淀粉和支链淀粉分离制备
1. 移取 1 毫升上述制备的预处理液到新的 2 毫升离心管,标记为直链淀粉
2. 加入 毫升 结合液(Reagent D)
3. 上下倾倒混匀数次
4. 室温下静置 60 分钟
5. 放进微型台式离心机离心 10 分钟,速度为 16000g (或 13000RPM,例如 eppendorf 5415)
6. 小心移取 1 毫升上清液到 15 毫升锥形离心管(注意: 须2 小时内使用,不能保存)
7. 加入 毫升 酸性液(Reagent E),混匀
8. 煮沸 5 分钟
9. 放进 40℃恒温水槽孵育 5 分钟
10.加入 微升 酶解液(Reagent F)
11.放进 40℃恒温水槽孵育 30 分钟
12.放进台式离心机离心 5 分钟,速度为 2000g
13.移取上清液到新的 15 毫升离心管
14.置于室温下备用
操作二:总淀粉制备
1. 移取 500 微升上述制备的预处理液到新的 15 毫升锥形离心管,标记为总淀粉
2. 加入 毫升 酸性液(Reagent E),混匀
3. 加入 微升 酶解液(Reagent F)
4. 放进 40℃恒温水槽孵育 10 分钟
5. 放进台式离心机离心 5 分钟,速度为 2000g
6. 移取上清液到新的 15 毫升锥形离心管
7. 置于室温下备用
操作三:标准液制备
1 . 准备 5 管 1.5 毫升离心管,标记为 A 至 E 号管
2 . 按下表分别加入试剂 ,混匀
| 管号 | 酸性液 (Reagent E) | 标准液 (Reagent I) | 测定体系 标准淀粉含量 |
| A | 微升 | 微升 | 微克 |
| B | 微升 | 微升 | 微克 |
| C | 微升 | 微升 | 微克 |
| D | 微升 | 微升 | 微克 |
| E | 微升 | 0 | 空对照 |
3. 分别加入 微升 酶解液(Reagent F)
4. 放进 40℃恒温水槽孵育 10 分钟
5. 放进台式离心机离心 5 分钟,速度为 2000g
6. 分别移取上清液到新的 1.5 毫升离心管
7. 置于室温下备用
二、 比色测定
1. 准备 7 个 1.5 毫升离心管,分别标记为: 5 个标准样(包括空对照)、直链淀粉、总淀粉
2. 分别加入 微升 缓冲液(Reagent G) 到每个离心管
3. 分别加入 微升上述制备的稀释的 标准液(Reagent I) 到标准样管
4. 加入 200 微升上述制备的直链淀粉样品到直链淀粉管
5. 加入 200 微升上述制备的总淀粉样品到总淀粉管
6. 分别加入 微升 催化液(Reagent H) 到所有离心管,混匀
7. 放进 40℃恒温水槽或培养箱孵育 20 分钟, 避免光照
8. 转移到比色皿
9. 即刻放进分光光度仪检测:波长 510nm
10.获得相应吸光读数:样品读数-背景空对照读数
三、 含量计算
1 . 构建测定体系淀粉含量标准曲线:纵座标(Y)为标准样品吸光值 OD510 读数,横座标(X)为对应 的淀粉含量(微克)
2 . 根据标准曲线获得样品对应淀粉含量
3 . 计算样品实际淀粉含量:总淀粉、直链淀粉和支链淀粉
1)总淀粉和直链淀粉含量
2)支链淀粉含量
3)样品总淀粉中直链淀粉和支链淀粉的百分比浓度
4) 样品重量中总淀粉、直链淀粉、支链淀粉的重量百分比浓度(毫克/毫克%)
根据微克淀粉/毫克样品换算
注意事项
1 . 本产品为 25 次(10 个样本)操作,包括标准测定
2 . 本产品检测范围为 0.4 至 2 毫克/毫升淀粉
3 . 操作时,须戴手套
4 . 样品制备后,须在 2 小时内检测,不宜保存
5 . 系统操作过程中,标准测定只需 1 次
6 . 背景空对照小于 0.05 为理想状态
7 . 孵育时,避免光照
8 . 比色测定后,比色皿须清洗彻底
9 . 如果待测样品浓度过高或过低,可以调整样品浓度
10.本公司提供系列淀粉检测试剂产品
质量标准
1 . 本产品经鉴定性能稳定
2 . 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后, 应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证 说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告) 与本公司联系,并将该产品退回, 经检验确系产品质量所致, 本公司负责更换产品。如系使用者错误操作 所致,本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK , RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
| 编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS19010.3. 1 | 通用型总淀粉+直链+支链淀粉比色法定量检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS19010.3. 1A | 融化液(Reagent A) | 100 毫升 |
| G&VS19010.3. 1B | 去脂液(Reagent B) | 100 毫升 |
| G&VS19010.3. 1C | 清理液(Reagent C) | 500 毫升 |
| G&VS19010.3. 1D | 结合液(Reagent D) | 100 毫升 |
| G&VS19010.3. 1E | 酸性液(Reagent E) | 100 毫升 |
| G&VS19010.3. 1F | 酶解液(Reagent F) | 10 毫升 |
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS19010. 1. 1 | 通用型直链淀粉比色法定量检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS19010. 1.2 | 食物直链淀粉比色法定量检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS19010. 1.3 | 植物直链淀粉比色法定量检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS19010.2. 1 | 通用型支链淀粉比色法定量检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS19010.2.2 | 食物支链淀粉比色法定量检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS19010.2.3 | 植物支链淀粉比色法定量检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS19010.3. 1 | 通用型总淀粉+直链+支链淀粉比色法定量检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS19010.3.2 | 食物总淀粉+直链+支链淀粉比色法定量检测试剂盒 | 20 次 |
| G&VS19010.3.3 | 植物总淀粉+直链+支链淀粉比色法定量检测试剂盒 | 20 次 |
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