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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

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体外非细胞系统细胞色素P450亚酶2J（arachidonic acid）活性高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒产品说明书

发布时间：2026/11/4 11:34:57 阅读次数：3

体外非细胞系统细胞色素P450亚酶2J（arachidonic acid）活性

高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒产品说明书

主要用途

体外非细胞系统细胞色素P450亚酶2J（arachidonic acid）活性高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒是一种旨在通过探针底物花生四烯酸，受到P450 2J的环氧化化作用，进而在高效液相色谱仪和紫外光谱下（200nm波长）检测分析花生四烯酸的变化，以定量测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种体液样品（血清和血浆等）或纯化微粒体或细胞色素P450酶2J的特异活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

细胞色素P450亚酶2J，简称为CYP2J，主要在肝外组织（extrahepatic tissue）高度表达，例如心脏、骨骼肌、胎盘、小肠、肾、肺、胰腺、膀胱和脑组织等，具有抗炎症、扩张血管、平滑肌松弛、新生血管生成等功能，主要作用于氨基比林（aminopyrine）、全反式维A酸（all-trans retinoic acid）、花生四烯酸及其衍生物（前列腺素（prostaglandin）、白三烯（leukotriene）和环氧二十碳三烯酸（epoxyeicosantrienoic acid；EET））等，氧化代谢其它各种外源化合物，包括阿司咪唑（astemizole）、依巴斯汀（ebastine）、特非那定（terfenadine）、阿苯达唑（albendazole）、乙胺碘酰酮（amiodarone）、苯非他明（benzphetamine）、双氯芬酸（diclofenac）、vorapoxar等，从而调节激素分泌、血管张力、肾微管分泌等。CYP2J在肿瘤组织中也高度表达，促使肿瘤生长和繁殖。CYP2J异常，将导致血管疾病、肿瘤表征、炎症、激素分泌变异、肾脏微管过滤功能失效等病理情况。兔为CYP2J1；大鼠为CYP2J3和2J4；小鼠为CYP2J5/6/9/11；人猿牛为CYP2J2。CYP2J的底物及其反应，主要包括：苯胺羟基化、氨基比林去甲基化、乙氧基香豆素脱乙基化、睾酮羟基化、全反式维A酸氧化、阿司咪唑-O-去甲基化、双氯芬酸羟基化、花生四烯酸环氧化等。花生四烯酸环氧化酶（arachidonic acid epoxygenase）是细胞色素P450亚酶2J的诊断标记。花生四烯酸（arachidonic acid）在CYP2J的催化下，转化为环氧二十碳三烯酸（epoxyeicosatrienoic acid；EETs）和羟基二十四烯酸（Hydroxyeicosatetraenoic acid；HETEs），通过高效液相色谱仪和紫外光谱下（200nm波长）检测分析花生四烯酸的变化，来定量测定细胞色素P450亚酶2J的活性。其反应系统为：

产品内容

缓冲液（Reagent A）毫升

反应液（Reagent B）微升

底物液（Reagent C）微升

终止液（Reagent D）毫升

萃取液（Reagent E）毫升

溶解液（Reagent F）毫升

流相液（Reagent G）毫升

标准液（Reagent H）微升

产品说明书 1份

保存方式

保存反应液（Reagent B）、底物液（Reagent C）和标准液（Reagent H）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，避免光照；试剂具有挥发性，注意密闭瓶盖；终止液（Reagent D）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于样品处理和标准液配制的容器

（微型）台式离心机：用于样品处理

恒温水槽或培养箱：用于样品反应孵育

高效液相色谱仪（HPLC）：用于定量测定

实验步骤

一、 样品准备

1．准备好待测样品，例如微粒体蛋白等（注意：建议使用动物组织微粒体组分分离试剂盒-G&VS18002）

2．置于冰槽里融化

一、 样品反应

1．移取xx微升缓冲液（Reagent A）到1.5毫升离心管

2．加入xx微升反应液（Reagent B）

3．加入xx微升底物液（Reagent C）

4．加入xx微升缓冲液（Reagent A）（作为背景对照）或待测样品（100微克总蛋白或20微克微粒体蛋白）（注意：样品须清澈）

5．上下倾倒数次，混匀

6．在37℃温度下孵育30分钟，避免光照

7．加入xx微升终止液（Reagent D），混匀

8．在37℃温度下孵育5分钟，避免光照

9．加入xx微升萃取液（Reagent E）

10．强力涡旋震荡15秒

11．重复实验步骤10二次

12．放进台式离心机离心5分钟，速度为2500g

13．移取上层液相到新的1.5毫升离心管

14．放进40℃干式培养箱晾干

15．加入xx微升溶解液（Reagent F），混匀

16．即刻进行高效液相色谱分析（注意：如果暂时保存，建议在4℃不超过48小时；-20℃不超过3月）

三、测定准备

1．开启仪器预热15分钟

2．根据下表设置高效液相色谱仪（HPLC）参数

参数	推荐	补充说明
色谱柱	长度：30cm 直径：4mm	Waters仪器或 Agilent仪器
固定相	ODS
流动相	流相液（Reagent G）	参见运行程序
流速	1毫升/分钟
注射容量	100微升
检测	紫外
波长	200nm
柱温	25℃
出峰时间（retention）	18分钟（花生四烯酸）	参考
运行时间	20分钟	参考

四、 标准样品配制

1．准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管

2．分别加入xx微升溶解液（Reagent F）到1至5号管

3．移取x微升标准液（Reagent H）到1号管，混匀

4．小心移取xx微升1号管稀释的标准液（Reagent H）到2号管，混匀

5．小心移取xx微升2号管稀释的标准液（Reagent H）到3号管，混匀

6．小心移取xx微升3号管稀释的标准液（Reagent H）到4号管，混匀

7．将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

管号	溶解液（Reagent F）	标准液（Reagent H）	标准花生四烯酸浓度
1	xx微升	xx微升	x微摩尔/升
2	xx微升	x微升1号管	xx微摩尔/升
3	xx微升	xx微升2号管	xx微摩尔/升
4	xx微升	xx微升3号管	xx微摩尔/升
5	xx微升	0	0

五、色谱分析

1．将上述配制的标准液（Reagent H）和待测样品放进冰槽里等待

2．每次（每个样品）注射100微升

3．按照检测运行程序每次（每个样品）运行20分钟

4．获得色谱波峰图：波峰面积（peak area）或峰值，保存记录

六、计算活性

1）样本花生四烯酸浓度计算

1．方法一：通过仪器中的软件进行测算

2．方法二：构建标准曲线：纵座标（Y轴）为波峰面积（peak area）；横座标（X轴）为标准花生四烯酸浓度（微摩尔/升），根据标准曲线获得样品对应花生四烯酸浓度（微摩尔/升）

3．方法三：公式计算（选择单一浓度的标准液）

背景或样本花生四烯酸浓度（微摩尔/升）=【样本波峰面积（peak area）X标准花生四烯酸浓度】÷对应标准花生四烯酸浓度的波峰面积

2）样本酶活性计算

注意事项

1．本产品为25次操作，包括标准液

2．操作时，须戴手套

3．系统操作过程中，标准液测定和背景对照测定只需1次

4．试剂具有挥发性，注意密闭瓶盖或使用封口膜

5．如果酶活性过低，可以增加反应时间至60分钟

6． 终止液（Reagent D）具有腐蚀性，注意操作安全

7．建议使用溶解液（Reagent F）作为阴性对照或作为基准线

8．色谱柱的异物残留、气泡产生、温度未达均衡等将导致异常波峰、时间偏移等

9．用户可以使用已知浓度的标准液（Reagent H）作为内参标准加入到样品中，然后进行萃取，检测回收率（recovery）

10．花生四烯酸的出峰时间（retention）以用户操作时，使用的标准液（Reagent H）实际出峰为准

11．建议待测样本为微粒体，其蛋白浓度为50微克/25微升（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒G&VS30030.1）

12．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度

13．花生四烯酸HPLC的参考图谱如下：

14．细胞色素P450亚酶2J单位活性定义为：在37℃，pH 7.4条件下，每分钟内能够氧化1纳摩尔花生四烯酸所需的酶量作为一个活性单位

15．本公司提供系列毒理学检测试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组份订购信息

编号名称规格

G&VS18192.2 体外非细胞系统细胞色素P450亚酶2J（arachidonic acid）活性高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒 20次

G&VS18192.2A 缓冲液（Reagent A）毫升

G&VS18192.2B 反应液（Reagent B）毫升

G&VS18192.2C 底物液（Reagent C）微升

G&VS18192.2D 终止液（Reagent D）毫升

G&VS18192.2E 萃取液（Reagent E）毫升

G&VS18192.2F 溶解液（Reagent F）毫升

G&VS18192.2G 流相液（Reagent G）毫升

G&VS18192.2H 标准液（Reagent H）毫升

试剂盒订购信息

产品编号	名称	规格
G&VS18001	细胞/组织S9组分分离试剂盒	50次
G&VS18002	细胞/组织微粒体组分分离试剂盒	50次
G&VS18003	细胞色素P450酶体系浓度定量检测试剂盒	20次
G&VS18190.1	细胞色素P450亚酶CYP2J（ECOD）活性荧光定量检测试剂盒（兔2J1/人2J2/大鼠2J3/2J4/小鼠2J5/2J6/2J9）	20次
G&VS18190.2	体外非细胞系统细胞色素P450亚酶CYP2J（ECOD）活性荧光定量检测试剂盒（兔2J1/人2J2/大鼠2J3/2J4/小鼠2J5/2J6/2J9）	20次
G&VS18191.1	细胞色素P450亚酶2J（ASTERMIZOLE）活性高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒	20次
G&VS18191.2	体外非细胞系统细胞色素P450亚酶2J（ASTERMIZOLE）活性高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒	20次
G&VS18192.1	细胞色素P450亚酶2J（arachidonic acid）活性高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒	20次
G&VS18192.2	体外非细胞系统细胞色素P450亚酶2J（arachidonic acid）活性高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒	20次