当前位置：首页>技术专栏
发布时间：2026/11/4 11:38:18 阅读次数：3
小鼠细胞色素P450亚酶CYP2B10（PROD）活性荧光定量检测试剂盒
产品说明书
主要用途
小鼠细胞色素P450亚酶CYP2B10（PROD）活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过戊氧基异酚噁唑脱甲基酶反应系统中特异性抑制剂的存在下，戊氧基异酚噁唑转化为羟基异吩噁唑酮后荧光峰值的变化，即采用荧光法来测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其主要适用于小鼠细胞或组织裂解萃取液样品或纯化微粒体样品细胞色素P450亚酶2B10的特异活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
细胞色素P450亚酶2B10，简称为CYP2B10，是肝细胞微粒体复合功能氧化酶系统的成员之一，属于铁硫化（heme-thiolate）单加氧化酶（monooxygenases）。属于细胞色素P450亚酶2B系列的一员。CYP2B9和CYP2B10主要存在于小鼠的肝脏、小肠和肺组织中，为结构性表达，其中CYP2B9在雌性小鼠的mRNA表达高于雄性小鼠，而CYP2B10没有差异。其类同于人体的2B6和2B7和大鼠的CYP2B1和CYP2B2。苯巴比妥可以诱导CYP2B10的表达和活化。CYP2B1的作用于外源化合物（xenobiotics），包括药物、致癌剂、化学污染物的氧化代谢。戊氧基异酚噁唑脱甲基酶（7-pentoxyresorufin -O-demethylase；PROD）的活性是细胞色素P450亚酶2B10的诊断标记，其基于PROD选择性催化细胞色素P450亚酶2B10的活性。基于底物戊氧基异酚噁唑（7-pentoxy resorufin），在9-乙炔菲（9-ethynylphenanthrene）存在与否的情况下，通过戊氧基异酚噁唑脱甲基酶的催化，转化为羟基异吩噁唑酮（resorufin）后荧光峰值的变化（激发波长530nm，散发波长590nm），来定量测定细胞色素P450亚酶2B10的特异活性。戊氧基异酚噁唑脱甲基酶反应系统为：
产品内容
缓冲液（Reagent A） 毫升
反应液（Reagent B） 毫升
底物液（Reagent C） 微升
标准液（Reagent D） 微升
专性液（Reagent E） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，底物液（Reagent C）和标准液（Reagent D）避免光照，有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于标准样品操作的容器
恒温水槽：用于孵育反应
比色皿或黑色96孔板：用于反应和荧光分析的容器
荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作。
一、 测定准备
1． 准备好待测样品（例如细胞或组织裂解萃取液或微粒体样品等），置于冰槽里
2． 设定好荧光分光光度仪（温度为37℃）：激发波长530nm，散发波长590nm，增益倍数100
3． 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
4． 加入xx微升缓冲液（Reagent A）到1号管
5． 分别加入xx微升缓冲液（Reagent A）到2至5号管
6． 移取xx微升标准液（Reagent D）到1号管，混匀
7． 小心移取xx微升1号管稀释的标准液（Reagent D）到2号管，混匀
8． 小心移取xx微升2号管稀释的标准液（Reagent D）到3号管，混匀
9． 小心移取xx微升3号管稀释的标准液（Reagent D）到4号管，混匀
10． 将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表
| 管号 | 缓冲液（Reagent A） | 标准液（Reagent D） | 标准羟基异吩噁唑酮浓度 |
| 1 | xx微升 | xx微升 | xx纳摩尔/升 |
| 2 | xx微升 | xx微升1号管 | xx纳摩尔/升 |
| 3 | xx微升 | xx微升2号管 | xx纳摩尔/升 |
| 4 | xx微升 | xx微升3号管 | xx纳摩尔/升 |
| 5 | xx微升 | 0 | 0 |
二、 标准曲线测定
1． 移取xx微升缓冲液（Reagent A）到新的比色皿
2． 加入xx微升反应液（Reagent B）
3． 加入xx微升底物液（Reagent C）
4． 加入25微升上述配制的标准液
5． 上下倾倒数次，混匀
6． 在37℃温度下孵育10分钟
7． 即刻放进荧光分光光度仪检测获得相对荧光单位（relative fluorescence unit；RFU）
8． 重复实验步骤1至7四次
9． 构建标准曲线：纵座标（Y轴）为相对荧光单位；横座标（X轴）为标准羟基异吩噁唑酮浓度（纳摩尔/升）
三、 样品总活性测定
1． 移取xx微升缓冲液（Reagent A）到新的比色皿
2． 加入xx微升反应液（Reagent B）
3． 加入xx微升底物液（Reagent C）
4． 加入25微升待测样品（20微克微粒体蛋白或100微克细胞裂解萃取液蛋白）（注意：样品须清澈）
5． 上下倾倒数次，混匀
6． 在37℃温度下孵育10分钟
7． 即刻放进荧光分光光度仪检测：获得相对荧光单位
8． 根据标准曲线获得样品对应羟基异吩噁唑酮浓度（纳摩尔/升）
四、 样品非特异活性测定
1． 移取xx微升缓冲液（Reagent A）到新的比色皿
2． 加入xx微升专性液（Reagent E）
3． 加入xx微升反应液（Reagent B）
4． 加入xx微升底物液（Reagent C）
5． 加入25微升待测样品（20微克微粒体蛋白或100微克细胞裂解萃取液蛋白）（注意：样品须清澈）
6． 上下倾倒数次，混匀
7． 在37℃温度下孵育10分钟
8． 即刻放进荧光分光光度仪检测：获得相对荧光单位
9． 根据标准曲线获得样品对应羟基异吩噁唑酮浓度（纳摩尔/升）
五、 计算样品活性
1） 样品活性（总活性或非特异活性）
2）样品特异活性
样品总活性－样品非特异活性＝样品特异活性
六、 荧光酶标仪测定
1）样品总活性测定
1． 在黑色96孔板上做好相应标记：标准样品和待测样品
2． 分别移取xx微升缓冲液（Reagent A）到相应孔里
3． 分别加入xx微升反应液（Reagent B）
4． 分别加入xx微升底物液（Reagent C）
5． 分别加入25微升上述配制的标准液或待测样品（20微克微粒体蛋白或100微克细胞裂解萃取液蛋白）（注意：样品须清澈）
6． 轻轻摇动黑色96孔板
7． 在37℃温度下孵育10分钟
8． 即刻放进荧光酶标仪检测：获得相对荧光单位
9． 构建标准曲线：纵座标（Y轴）为相对荧光单位；横座标（X轴）为标准羟基异吩噁唑酮浓度（纳摩尔/升）
10． 根据标准曲线获得样品对应羟基异吩噁唑酮浓度（纳摩尔/升）
11． 活性计算：
2）样品非特异活性测定
1． 在黑色96孔板上做好相应标记：待测样品
2． 移取xx微升缓冲液（Reagent A）到96板孔里
3． 加入xx微升专性液（Reagent E）
4． 加入xx微升反应液（Reagent B）
5． 加入xx微升底物液（Reagent C）
6． 加入25微升待测样品（20微克微粒体蛋白或100微克细胞裂解萃取液蛋白）（注意：样品须清澈）
7． 轻轻摇动黑色96孔板
8． 在37℃温度下孵育10分钟
9． 即刻放进荧光酶标仪检测：获得相对荧光单位
10． 根据标准曲线获得样品对应羟基异吩噁唑酮浓度（纳摩尔/升）
11． 活性计算：
[根据标准曲线获得样品对应羟基异吩噁唑酮浓度（纳摩尔/升）X样品稀释倍数]÷ 10（反应时间；分钟）]＝皮摩尔/毫升/分钟÷（样品蛋白浓度）毫克/毫升＝皮摩尔/毫克/分钟
3） 样品特异活性计算
注意事项
1． 本产品为25次操作，包括标准液
2． 操作时，须戴手套
3． 系统操作过程中，标准液测定只需1次
4． 样品须澄清，至关重要（本公司提供细胞可溶性总蛋白质制备试剂盒G&VS30002.1）
5． 荧光检测易受到蛋白的干扰，例如牛血清白蛋白（bovine serum albumin；BSA）会与羟基异吩噁唑酮（resorufin）结合，导致荧光读数的降低
6． 如果样品读数低于背景读数明显，建议使用失活的样品作为样品背景对照，以及标准样品测定
7． 孵育反应完成后即刻进行荧光测定
8． 如果酶活性过低，可以增加反应时间至30分钟
9． 荧光测定后，比色皿须清洗彻底
10． 建议待测样本为微粒体，其蛋白浓度为20微克/25微升；待测样本为细胞或组织裂解悬液，其蛋白浓度为100至200微克/25微升（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒G&VS30030.1）
11． 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
12． 如果检测血液样品，建议使用体外非细胞系统细胞色素P450亚酶2B10活性荧光定量检测试剂盒——G&VS18173.2
13． 样品特异活性是指9-乙炔菲（9-ethynylphenanthrene）敏感的细胞色素P450亚酶CYP2B10活性，去除其它CYP2B的干扰
14． 细胞色素P450亚酶CYP2B10单位活性定义为：在37℃，pH 7.5条件下，每分钟内能够转化1纳摩尔戊氧基异酚噁唑至羟基异吩噁唑酮所需的酶量作为一个活性单位
15． 本公司提供系列毒理学检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS18173.1 小鼠细胞色素P450亚酶CYP2B10活性荧光定量检测试剂盒 25/85次
G&VS18173.1A 缓冲液（Reagent A） 毫升
G&VS18173.1B 反应液（Reagent B） 毫升
G&VS18173.1C 底物液（Reagent C） 毫升
G&VS18173.1D 标准液（Reagent D） 微升
G&VS18173.1E 专性液（Reagent E） 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS18001 | 动物组织S9组分分离试剂盒 | 50次 |
| G&VS18002 | 动物组织微粒体组分分离试剂盒 | 50次 |
| G&VS18003 | 动物组织细胞色素P450酶体系浓度定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS18016.1 | 细胞色素P450酶（CYP－ECOD）总活性荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS18016.2 | 体外非细胞系统细胞色素P450亚酶（CYP－ECOD）总活性荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS18019.1 | 大鼠细胞色素P450亚酶CYP2B1（PROD）活性荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS18019.2 | 体外非细胞系统细胞色素P450亚酶CYP2B1（PROD）活性荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS18020.1 | 大鼠细胞色素P450亚酶CYP2B2（PROD）活性荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS18020.2 | 体外非细胞系统细胞色素P450亚酶CYP2B2（PROD）活性荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS18025.1 | 细胞色素P450亚酶CYP2B（EFC）活性荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS18025.2 | 体外非细胞系统细胞色素P450亚酶CYP2B（EFC）活性荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS18053.1 | 细胞色素P450亚酶CYP2B6（EFC）活性荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS18053.2 | 体外非细胞系统细胞色素P450亚酶CYP2B6（EFC）活性荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS18173.1 | 小鼠细胞色素P450亚酶CYP2B10（PROD）活性荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS18173.2 | 体外非细胞系统细胞色素P450亚酶CYP2B10（PROD）活性荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
上海极威生物科技有限公司 公司地址:上海市崇明县长兴镇潘园公路1800号2号楼9703室
邮箱：435399850@qq.com 电话：021-80186165 手机：16602115336
备案号：沪ICP备15046135号-7
