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植物细胞色素P450亚酶71（PSORALEN SYNTHASE；MARMESIN）活性高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒产品说明书

发布时间：2026/11/4 11:40:30 阅读次数：3

植物细胞色素P450亚酶71（PSORALEN SYNTHASE；MARMESIN）活性

高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒产品说明书

主要用途

植物细胞色素P450亚酶71（PSORALEN SYNTHASE；MARMESIN）活性高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒是一种旨在通过探针底物异紫花前胡内酯，受到P450-71的氧化作用，进而在高效液相色谱仪和紫外光谱下（312nm波长）检测分析其代谢产物，以定量测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种植物细胞或组织裂解萃取液样品、纯化微粒体样品细胞色素P450亚酶CYP71的活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

细胞色素P450酶属于单加氧化酶（monooxygenase）一类的酶，其含亚铁血红素（heme），存在于所有生命系统内。在真核系统，为膜结合性，而原核生物，为胞浆蛋白。细胞色素P450酶共有15000种，植物细胞色素P450酶约有5000种。植物P450酶的作用在于体内内源化合物（endobiotics）和外源化合物（xenobiotics），包括除草剂（herbicides）、杀虫剂（pesticides）、杀真菌剂（fundicides）、污染物（pollutants）的氧化代谢，即单加氧化作用（monooxygenation）和羟化作用（hydroxylation），以达到解毒效果，同时合成次级代谢产物，例如酚类、膜性固醇、植物防御素（phytoallexin）、类萜（terpenoid），以及色素、复杂性大分子（例如角质cutin、木质素lignin、软木质suberin）和脂肪酸等。并在伤口愈合、抗虫害、抗微生物和真菌、以及信号传导中发挥重要作用。其中P450亚酶CYP71共有84种，占P450总量的20％，为最大的植物P450家族。补骨脂素合成酶（Psoralen synthase）是细胞色素P450亚酶71的主要成员之一，包括大豆（soybean）71A9、A10、D8、D9、D10；茄子（Solanum melongena）A2、A4；总花猫薄荷（Nepeta racemosa）A5、A6；拟南芥A1等。基于底物异紫花前胡内酯（marmesin）在补骨脂素合成酶的催化下，转化为补骨脂素（psoralen），通过高效液相色谱仪和紫外光谱下（312nm波长）检测分析，来定量测定细胞色素P450亚酶71的活性。其反应系统为：

产品内容

缓冲液（Reagent A）毫升

反应液（Reagent B）微升

底物液（Reagent C）微升

终止液（Reagent D）毫升

流相液（Reagent E）毫升

标准液（Reagent F）微升

产品说明书 1份

保存方式

保存缓冲液（Reagent A）、反应液（Reagent B）、底物液（Reagent C）和标准液（Reagent F）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，避免光照；试剂具有挥发性，注意密闭瓶盖；终止液（Reagent D）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于样品处理和标准液配制的容器

（微型）台式离心机：用于样品处理

恒温水槽或培养箱：用于样品反应孵育

高效液相色谱仪（HPLC）：用于定量测定

实验步骤

一、 样品准备

1．准备好待测样品，例如微粒体蛋白等

2．置于冰槽里融化

一、 样品反应

1．移取xx微升缓冲液（Reagent A）到1.5毫升离心管

2．加入xx微升反应液（Reagent B）

3．加入xx微升底物液（Reagent C）

4．加入20微升待测样品（50微克微粒体蛋白）（注意：样品须清澈）

5．枪头抽吸混匀

6．在27℃温度下孵育60分钟

7．加入xx微升终止液（Reagent D）

8．温和涡旋震荡5秒

9．放进微型台式离心机离心10分钟，速度为16000g

10．小心移取50微升上清液到新的1.5毫升离心管

11．放进浓缩离心机挥干

12．加入xx微升流相液（Reagent E）

13．温和涡旋震荡10秒

14．即刻进行高效液相色谱分析（注意：如果暂时保存，建议在-20℃不超过3月）

三、测定准备

1．开启仪器预热15分钟

2．根据下表设置高效液相色谱仪（HPLC）参数

参数	推荐	补充说明
色谱柱	长度：12.5cm 直径：4mm	Waters仪器或 Agilent仪器
固定相	ODS
流动相	流相液（Reagent E）	参见运行程序
流速	0.9毫升/分钟
注射容量	100微升	10微升至100微升
检测	紫外
波长	312nm
柱温	25℃
出峰时间（retention）	19分钟（异紫花前胡内酯）； 20分钟（补骨脂素）	参考
运行时间	35分钟	参考

3．运行程序

运行时段	程序	时间
开机后预运行	100% 流相液（Reagent E）	总10分钟
检测运行时段	0% 流相液（Reagent E）至 60%流相液（Reagent E）	0至25分钟
检测运行时段	100% 流相液（Reagent E）	25至35分钟
关机前运行	100% 流相液（Reagent E）	总10分钟

四、 标准样品配制

1．准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管

2．分别加入xx微升流相液（Reagent E）到1至5号管

3．移取xx微升标准液（Reagent F）到1号管，混匀

4．小心移取xx微升1号管稀释的标准液（Reagent F）到2号管，混匀

5．小心移取xx微升2号管稀释的标准液（Reagent F）到3号管，混匀

6．小心移取xx微升3号管稀释的标准液（Reagent F）到4号管，混匀

7．将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

管号	流相液（Reagent E）	标准液（Reagent F）	标准补骨脂素浓度
1	xx微升	xx微升	xx微摩尔/升
2	xx微升	xx微升1号管	xx微摩尔/升
3	xx微升	xx微升2号管	xx微摩尔/升
4	xx微升	xx微升3号管	xx微摩尔/升
5	xx微升	0	0

五、色谱分析

1．将上述配制的标准液（Reagent F）和待测样品放进冰槽里等待

2．每次（每个样品）注射100微升

3．按照检测运行程序每次（每个样品）运行35分钟

4．获得色谱波峰图：波峰面积（peak area）或峰值，保存记录

六、计算活性

1）样本补骨脂素浓度计算

2）样本酶活性计算

注意事项

1．本产品为25次操作，包括标准液

2．操作时，须戴手套

3．系统操作过程中，标准液测定只需1次

4．试剂具有挥发性，注意密闭瓶盖或使用封口膜

5．如果酶活性过低，可以增加反应时间至120分钟

6． 终止液（Reagent D）具有腐蚀性，注意操作安全

7．建议使用流相液（Reagent E）作为阴性对照或作为基准线

8．色谱柱的异物残留、气泡产生、温度未达均衡等将导致异常波峰、时间偏移等

9．用户可以使用已知浓度的标准液（Reagent F）作为内参标准加入到样品中，然后进行萃取，检测回收率（recovery）

10．补骨脂素的出峰时间（retention）以用户操作时，使用的标准液（Reagent F）实际出峰为准

11．建议待测样本为微粒体，其蛋白浓度为50微克/20微升（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒G&VS30030.1）

12．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度

13．异紫花前胡内酯（S）和补骨脂素（P）HPLC的参考图谱如下：

14．细胞色素P450亚酶71单位活性定义为：在27℃，pH 7.0条件下，每分钟内能够产生1纳摩尔补骨脂素所需的酶量作为一个活性单位

15．本公司提供系列毒理学检测试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组份订购信息

编号名称规格

G&VS18124.1 植物细胞色素P450亚酶71 活性高效液相色谱法定量检测试剂盒 20次

G&VS18124.1A 缓冲液（Reagent A）毫升

G&VS18124.1B 反应液（Reagent B）毫升

G&VS18124.1C 底物液（Reagent C）微升

G&VS18124.1D 终止液（Reagent D）毫升

G&VS18124.1E 流相液（Reagent E）毫升

G&VS18124.1F 标准液（Reagent F）毫升

试剂盒订购信息

产品编号	名称	规格
G&VS18081.1	植物细胞色素P450亚酶71A12（PYRAZOXYFEN）活性高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒	20次
G&VS18081.2	体外非细胞系统植物细胞色素P450亚酶71A12（PYRAZOXYFEN）活性高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒	20次
G&VS18082.1	植物细胞色素P450亚酶71A13（INDOLE ACETALDOXIME）活性高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒	20次
G&VS18082.2	体外非细胞系统植物细胞色素P450亚酶71A13（INDOLE ACETALDOXIME）活性高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒	20次
G&VS18083.1	植物细胞色素P450亚酶71B7（ETHOXYCOURMARIN）活性高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒	20次
G&VS18083.2	体外非细胞系统植物细胞色素P450亚酶71B7（ETHOXYCOURMARIN）活性高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒	20次
G&VS18084.1	植物细胞色素P450亚酶71B15（DIHYDROXYCAMALEXIC ACID）活性高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒	20次
G&VS18084.2	体外非细胞系统植物细胞色素P450亚酶71B15（DIHYDROXYCAMALEXIC ACID）活性高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒	20次
G&VS18085.1	植物细胞色素P450亚酶71D15（LIMONENE）活性高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒	20次
G&VS18085.2	体外非细胞系统植物细胞色素P450亚酶71D15（LIMONENE）活性高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒	20次
G&VS18124.1	植物细胞色素P450亚酶71（PSORALEN SYNTHASE；MARMESIN）活性高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒	20次
G&VS18124.2	体外非细胞系统植物细胞色素P450亚酶71（PSORALEN SYNTHASE；MARMESIN）活性高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒	20次
G&VS18125.1	植物纯化细胞色素P450亚酶71底物筛选高效液相色谱法（HPLC）检测试剂盒（5种底物/盒；共50种）	20次
G&VS18125.2	植物纯化细胞色素P450亚酶71底物结合光谱法（substrate binding spectra）检测试剂盒（5种底物/盒；共50种）	20次