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发布时间：2026/11/4 11:43:30 阅读次数：3
细胞色素P450亚酶CYP2A13（COH）活性荧光定量检测试剂盒
产品说明书
主要用途
细胞色素P450亚酶CYP2A13（COH）活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过香豆素脱羟基化酶反应系统中特异性抑制剂的存在下，香豆素转化为羟基香豆素后荧光峰值的变化，即采用荧光法来测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种人体细胞或组织裂解萃取液样品或纯化微粒体样品细胞色素P450亚酶CYP2A13的总活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
细胞色素P450酶是肝细胞微粒体复合功能单加氧化酶系统的总称。其分成五十多个亚酶：CYP1至CYP51。作用在于体内外源化合物（xenobiotics），包括药物、致癌剂、化学污染物的氧化代谢，即单加氧化作用（monooxygenation）和羟化作用（hydroxylation）。香豆素羟基化酶（courmarin 7-hydroxylase；COH）的活性是细胞色素P450亚酶2A的诊断标记，其基于COH选择性催化细胞色素P450亚酶2A的活性。人体细胞色素P450亚酶2A（CYP2A；EC1.14.14.1），包括2A6、2A7、2A13；大鼠中包括2A1、2A2、2A3；小鼠中包括2A4、2A5、2A12、2A22等。人体2A6主要表达在肝组织上，占4%总细胞色素P450蛋白；人体2A13主要表达在呼吸道上（包括鼻粘膜、肺组织、气管），与2A6具有94%相似性；人体2A7为非功能性。2A13催化烟草特异性亚硝胺（nitrosamine）的生物活化，与吸烟者肺癌的启动有关。其作用于苯基苯胺（aminobiphenyl）、4-甲基亚硝胺基-1-3-吡啶基-1-丁酮（4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone；NNK）、 4-(甲基亚硝胺)-1-(3-吡啶基)-1-丁醇（ 4-[methyl(nitroso)amino]-1-(pyridin-3-yl)butanol；NNAL）、甲苯（toluene）、3-甲基吲哚（3-methylindole）、尼古丁（nicotine）、可替丁（cotinine）、香豆素（coumarin）、亚硝胺（nitrosamine）、雄激素、丁二烯（butadiene）、黄曲霉毒素B1（aflatoxin B1）的代谢。基于底物香豆素（coumarin），在8-甲氧基补骨脂素（8-methoxypsoralen；8-MOP）存在与否的情况下，通过香豆素羟基化酶，即CYP2A13的催化，转化为羟基香豆素（7-hydroxycoumarin）后荧光峰值的变化（激发波长368nm，散发波长456nm），来定量测定细胞色素P450酶CYP2A13的活性。香豆素羟基化酶反应系统为：
产品内容
缓冲液（Reagent A） 毫升
反应液（Reagent B） 毫升
底物液（Reagent C） 微升
终止液（Reagent D） 毫升
强化液（Reagent E） 毫升
标准液（Reagent F） 微升
专性液（Reagent G） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里；反应液（Reagent B）、底物液（Reagent C）和标准液（Reagent F）避免光照，终止液（Reagent D）和强化液（Reagent E）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于标准样品配制和反应的容器
培养箱：用于孵育反应
200微升1厘米光径比色皿或黑色96孔板：用于荧光分析的容器
荧光分光光度仪过荧光酶标仪：用于荧光分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作。
一、 测定准备
1． 准备好待测样品（例如细胞裂解萃取液或微粒体样品等），置于冰槽里
2． 设定好荧光分光光度仪（温度为37℃）：激发波长370nm，散发波长450nm，并置零
3． 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
4． 分别加入xx微升缓冲液（Reagent A）到每个离心管
5． 移取xx微升标准液（Reagent F）到1号管，混匀
6． 小心移取xx微升1号管稀释的标准液（Reagent F）到2号管，混匀
7． 小心移取xx微升2号管稀释的标准液（Reagent F）到3号管，混匀
8． 小心移取xx微升3号管稀释的标准液（Reagent F）到4号管，混匀
9． 将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表
| 管号 | 缓冲液（Reagent A） | 标准液（Reagent F） | 测定体系 标准羟基香豆素浓度 |
| 1 | xx微升 | xx微升 | 1微摩尔/升 |
| 2 | xx微升 | xx微升1号管 | 0.5微摩尔/升 |
| 3 | xx微升 | xx微升2号管 | 0.25微摩尔/升 |
| 4 | xx微升 | xx微升3号管 | 0.125微摩尔/升 |
| 5 | xx微升 | 空对照 | 0 |
二、 标准曲线测定
1． 移取xx微升缓冲液（Reagent A）到1.5毫升离心管
2． 加入xx微升反应液（Reagent B）
3． 加入xx微升底物液（Reagent C）
4． 加入20微升上述配制的标准样品
5． 上下倾倒数次，混匀
6． 在37℃温度下孵育15分钟，避免光照
7． 加入xx微升终止液（Reagent D），混匀
8． 在37℃温度下孵育15分钟，避免光照
9． 加入xx微升强化液（Reagent E），混匀
10． 转移到新的比色皿或黑色96孔板
11． 即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测，获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
12． 实际荧光单位：标准样相对荧光读数－5号管标准样荧光读数（作为空对照）
13． 构建标准曲线：纵座标（Y轴）为实际相对荧光单位（RFU）；横座标（X轴）为标准羟基香豆素浓度（微摩尔/升）
三、 样品总活性测定
1． 移取xx微升缓冲液（Reagent A）到1.5毫升离心管
2． 加入xx微升反应液（Reagent B）
3． 加入xx微升底物液（Reagent C）
4． 加入20微升待测样品（20微克微粒体蛋白或100微克细胞裂解萃取液蛋白）（注意：样品须清澈）
5． 上下倾倒数次，混匀
6． 在37℃温度下孵育15分钟，避免光照
7． 加入xx微升终止液（Reagent D），混匀
8． 在37℃温度下孵育15分钟，避免光照
9． 加入xx微升强化液（Reagent E），混匀
10． 转移到新的比色皿或黑色96孔板
11． 即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测，获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
12． 实际荧光单位：样品相对荧光读数－5号管标准样荧光读数（作为空对照）
13． 根据标准曲线获得样品对应羟基香豆素浓度（微摩尔/升）
四、 样品非特异活性测定
1． 移取xx微升缓冲液（Reagent A）到1.5毫升离心管
2． 加入xx微升反应液（Reagent B）
3． 加入xx微升底物液（Reagent C）
4． 加入xx微升专性液（Reagent G）
5． 加入20微升待测样品（20微克微粒体蛋白或100微克细胞裂解萃取液蛋白）（注意：样品须清澈）
6． 上下倾倒数次，混匀
7． 在37℃温度下孵育15分钟，避免光照
8． 加入xx微升终止液（Reagent D），混匀
9． 在37℃温度下孵育15分钟，避免光照
10． 加入xx微升强化液（Reagent E），混匀
11． 转移到新的比色皿或黑色96孔板
12． 即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测，获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
13． 实际荧光单位：样品相对荧光读数－5号管标准样荧光读数（作为空对照）
14． 根据标准曲线获得样品对应羟基香豆素浓度（微摩尔/升）
五、 计算样品实际活性
1） 样品活性（总活性或非特异活性）
2）样品特异活性
注意事项
1． 本产品为25次操作，包括标准测定
2． 操作时，须戴手套
3． 系统操作过程中，标准液测定只需1次
4． 终止液（Reagent D）和强化液（Reagent E）具有腐蚀性，注意操作安全
5． 样品须澄清，至关重要（本公司提供细胞/组织微粒体组分分离试剂盒G&VS18002）
6． 如果酶活性过低，可以增加孵育时间至45分钟（37℃温度下）
7． 荧光测定后，比色皿须清洗彻底
8． 建议待测样本为微粒体，其蛋白浓度为20微克/20微升；待测样本为细胞/组织裂解悬液，其蛋白浓度为100至200微克/20微升（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒G&VS30030.1）
9． 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
10． 如果检测血液样品，建议使用体外非细胞系统细胞色素P450亚酶CYP2A6/2A3/2A5活性荧光定量检测试剂盒——G&VS18052.2
11． 细胞色素P450亚酶CYP2A13单位活性定义为：在37℃，pH 7.4条件下，每分钟内能够转化1纳摩尔香豆素至羟基香豆素所需的酶量作为一个活性单位
12． 本公司提供系列毒理学检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组份订购信息
编号 名称 规格
G&VS18072.1 细胞色素P450亚酶CYP2A13活性荧光定量检测试剂盒 25次
G&VS18072.1A 缓冲液（Reagent A） 毫升
G&VS18072.1B 反应液（Reagent B） 毫升
G&VS18072.1C 底物液（Reagent C） 微升
G&VS18072.1D 终止液（Reagent D） 毫升
G&VS18072.1E 强化液（Reagent E） 毫升
G&VS18072.1F 标准液（Reagent F） 微升
G&VS18072.1G 专性液（Reagent G） 微升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS18001 | 细胞/组织S9组分分离试剂盒 | 50次 |
| G&VS18002 | 细胞/组织微粒体组分分离试剂盒 | 50次 |
| G&VS18003 | 细胞色素P450酶体系浓度定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS18016.1 | 细胞色素P450酶（CYP－ECOD）总活性荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS18016.2 | 体外非细胞系统细胞色素P450亚酶（CYP－ECOD）总活性荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS18024.1 | 细胞色素P450亚酶CYP2A（COH）活性荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS18024.2 | 体外非细胞系统细胞色素P450亚酶CYP2A（COH）活性荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS18052.1 | 细胞色素P450亚酶CYP2A6（2A3/2A5）（COUMARIN）活性荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS18052.2 | 体外非细胞系统细胞色素P450亚酶CYP2A6（2A3/2A5）（COUMARIN）活性 荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS18072.1 | 细胞色素P450亚酶CYP2A13（COURMARIN）活性荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS18072.2 | 体外非细胞系统细胞色素P450亚酶CYP2A13（COURMARIN）活性荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
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