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发布时间：2026/11/4 11:44:19 阅读次数：3
体外非细胞系统细胞色素P450亚酶CYP19活性荧光定量检测试剂盒产品说明书
主要用途
体外非细胞系统细胞色素P450亚酶CYP19活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过NADPH生成系统和甲氧基三氟甲基香豆素脱烷基反应系统中甲氧基三氟甲基香豆素转化为羟基三氟甲基香豆素后荧光峰值的变化，即采用荧光法来测定酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于体液样品（血清和血浆等）或纯化细胞色素P450亚酶19的活性检测，以及诱导剂和抑制剂筛选等。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
细胞色素P450亚酶19，简称为CYP19，又称为芳香化酶（aromatase；EC1.14.14.1），是肝细胞微粒体复合功能氧化酶系统的成员之一，存在于性腺、脑、脂肪组织、胎盘、血管等组织细胞内质网内的单加氧化酶（monooxygenases）。CYP19主要作用在于通过羟基化、去甲基化和芳香基化，将C19雄激素，例如睾酮（testosterone），转化为C18雌激素类固醇，是机体雌激素生物合成的最后反应的关键元素。CYP19的作用在于进行体内脂类、胆固醇、类固醇、以及外源化合物（xenobiotics），包括药物等的氧化代谢。CYP19是人体性发育的重要因子。CYP19异常增高将导致男子女性型乳房（gynecomastia）、女性性早熟（precocious puberty）疾病和肿瘤等；CYP19缺陷将导致女性男性化（virilization）和原发性闭经（primary amenorrhea）。甲氧基三氟甲基香豆素脱烷基作用（7-methoxy- 4-trifluoromethylcoumarin dealkylation；MFCD）的活性是细胞色素P450亚酶19的诊断标记。基于底物甲氧基三氟甲基香豆素（7-methoxy- 4-trifluoromethylcoumarin；MFC），在NADPH生成系统（NADPH generating system）的存在下，通过CYP19的催化，转化为羟基三氟甲基香豆素（7-hydroxy- 4-trifluoromethylcoumarin；HFC）后荧光峰值的变化（激发波长410nm，散发波长538nm），来定量测定细胞色素P450亚酶CYP19的活性，以及诱导剂和抑制剂筛选。甲氧基三氟甲基香豆素脱烷基反应系统为：
产品内容
缓冲液（Reagent A） 毫升
反应液（Reagent B） 毫升
底物液（Reagent C） 微升
终止液（Reagent D） 毫升
标准液（Reagent E） 微升
专性液（Reagent F） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存在－20℃冰箱里，反应液（Reeagent B）、底物液（Reagent C）和标准液（Reagent E）避免光照；有效保证6月
用户自备
CYP19：用于抑制剂或诱导剂筛选
1.5毫升离心管：用于标准样品操作的容器
恒温水槽：用于孵育反应
200微升1厘米光径比色皿或黑色96孔板：用于荧光分析的容器
荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于荧光分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化。然后进行下列操作
一、 测定准备
1． 准备好待测样品（例如纯化酶蛋白样品等），置于冰槽里
2． 设定好荧光分光光度仪（温度为37℃）：激发波长410±20nm，散发波长530±25nm，并置零
3． 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
4． 分别加入xx微升缓冲液（Reagent A）到每个离心管
5． 移取xx微升标准液（Reagent E）到1号管，混匀
6． 小心移取xx微升1号管稀释的标准液（Reagent E）到2号管，混匀
7． 小心移取xx微升2号管稀释的标准液（Reagent E）到3号管，混匀
8． 小心移取xx微升3号管稀释的标准液（Reagent E）到4号管，混匀
9． 将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表
| 管号 | 缓冲液（Reagent A） | 标准液（Reagent E） | 测定体系 标准羟基三氟甲基香豆素浓度 |
| 1 | xx微升 | xx微升 | xx微摩尔/升 |
| 2 | xx微升 | xx微升1号管 | xx微摩尔/升 |
| 3 | xx微升 | xx微升2号管 | xx微摩尔/升 |
| 4 | xx微升 | xx微升3号管 | xx微摩尔/升 |
| 5 | xx微升 | 空对照 | 0 |
二、 标准曲线测定
1． 移取xx微升缓冲液（Reagent A）到1.5毫升离心管
2． 加入xx微升反应液（Reagent B）
3． 加入xx微升底物液（Reagent C）
4． 加入20微升上述配制的标准液
5． 在37℃温度下孵育30分钟，避免光照
6． 加入xx微升终止液（Reagent D），混匀
7． 移入到比色皿或黑色96孔板
8． 即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测，获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
9． 重复实验步骤1至9，测读完所有标准样品
10． 实际荧光单位：标准样相对荧光读数－5号管标准样荧光读数（作为空对照）
11． 构建标准曲线：纵座标（Y轴）为实际相对荧光单位（RFU）；横座标（X轴）为标准羟基三氟甲基香豆素浓度（微摩尔/升）
三、 样品总活性测定
1． 移取xx微升缓冲液（Reagent A）到1.5毫升离心管
2． 加入xx微升反应液（Reagent B）
3． 加入xx微升底物液（Reagent C）
4． 加入20微升待测样品（20微克微粒体蛋白或100微克血清蛋白）（注意：样品须清澈）
5． 在37℃温度下孵育30分钟，避免光照
6． 加入xx微升终止液（Reagent D），混匀
7． 移入到比色皿或黑色96孔板
8． 即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测，获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
9． 实际荧光单位：样品总活性相对荧光读数－5号管标准样荧光读数（作为空对照）
10． 根据标准曲线获得样品总活性对应羟基三氟甲基香豆素浓度（微摩尔/升）
四、 样品非特异活性测定
检测开始前，分别移取xx微升专性液（Reagent F）和待测样品（20微克微粒体蛋白或100微克血清蛋白）到1.5毫升离心管，混匀后，放进37℃培养箱里孵育10分钟。然后继续下列操作。
1． 移取xx微升缓冲液（Reagent A）到1.5毫升离心管
2． 加入xx微升反应液（Reagent B）
3． 加入xx微升底物液（Reagent C）
4． 加入40微升上述预处理的待测样品
5． 在37℃温度下孵育30分钟，避免光照
6． 加入xx微升终止液（Reagent D），混匀
7． 移入到比色皿或黑色96孔板
8． 即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测，获得相对荧光单位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
9． 实际荧光单位：样品非特异活性相对荧光读数－5号管标准样荧光读数（作为空对照）
10． 根据标准曲线获得样品非特异活性对应羟基三氟甲基香豆素浓度（微摩尔/升）
五、 计算样品活性
1） 样品总活性和非特异活性计算
2）样品特异活性计算
六、抑制剂筛选
1． 在黑色96孔板上做好相应标记：背景、零抑制、完全抑制和待测抑制剂样品
2． 按下表加入试剂
| 内容物 | 样本背景 | 零抑制对照 （0％抑制） | 完全抑制对照 （100％抑制） | 待测抑制活性 |
| 缓冲液（Reagent A） | xx微升 | xx微升 | xx微升 | xx微升 |
| 反应液（Reagent B） | ―― | xx微升 | xx微升 | xx微升 |
| 待测抑制剂 | xx微升 | ―― | ―― | xx微升 |
| 用户自备的纯化酶 | xx微升 | xx微升 | —— | xx微升 |
| 轻轻摇动黑色96孔板，在37℃温度下孵育30分钟 | ||||
| 底物液（Reagent C） | xx微升 | xx微升 | xx微升 | xx微升 |
| 黑色96孔板每孔总量 | 背景孔 （xx微升） | 零抑制孔 （xx微升） | 完全抑制孔 （xx微升） | 待测抑制剂样品 （xx微升） |
3． 轻轻摇动黑色96孔板
4． 在37℃温度下孵育30分钟
5． 加入xx微升终止液（Reagent D），混匀
6． 即刻放进荧光酶标仪检测：获得相对荧光读数RFU（Relative Fluorescence Unit）
7． 抑制活性计算：
注意事项
1． 本产品为25次操作，包括标准液
2． 操作时，须戴手套
3． 用户可以使用免疫沉淀获得CYP19蛋白，进行活性检测
4． 系统操作过程中，标准液测定只需1次
5． 样品须澄清，至关重要
6． 如果检测纯化或粗提细胞色素P450亚酶19的活性，可以免去非特异活性的检测步骤
7． 孵育反应完成后即刻进行荧光测定
8． 如果酶活性过低，可以增加反应时间至45分钟
9． 荧光测定后，比色皿须清洗彻底
10． 如果待测样本为血清，其蛋白浓度为100微克/20微升；待测样本为微粒体，其蛋白浓度为20微克/20微升；待测样本为酶蛋白，其蛋白浓度为10微克/20微升（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒G&VS30030.1）
11． 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
12． 可以使用CYP19抑制剂酮康唑（ketoconazole；IC50=0.58微摩尔）作为抑制剂对照或阴性对照
13． 细胞色素P450亚酶CYP19单位活性定义为：在37℃，pH 7.5条件下，每分钟内能够转化1纳摩尔甲氧基三氟甲基香豆素至羟基三氟甲基香豆素所需的酶量作为一个活性单位
14． 本公司提供系列毒理学检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组份订购信息
编号 名称 规格
G&VS18058.2 体外非细胞系统细胞色素P450亚酶CYP19活性荧光定量检测试剂盒 20次
G&VS18058.2A 缓冲液（Reagent A） 毫升
G&VS18058.2B 反应液（Reagent B） 毫升
G&VS18058.2C 底物液（Reagent C） 毫升
G&VS18058.2D 终止液（Reagent D） 毫升
G&VS18058.2E 标准液（Reagent E） 毫升
G&VS18058.2F 专性液（Reagent F） 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS18001 | 动物组织S9组分分离试剂盒 | 50次 |
| G&VS18002 | 动物组织微粒体组分分离试剂盒 | 50次 |
| G&VS18003 | 动物组织细胞色素P450酶体系浓度定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS18058.1 | 细胞色素P450亚酶CYP19（MFC）活性荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS18058.2 | 体外非细胞系统细胞色素P450亚酶CYP19（MFC）活性荧光定量检测试剂盒 | 20次 |
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