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发布时间：2026/11/4 15:37:19 阅读次数：4
细胞谷氨酸含量比色法定量检测试剂盒品说明书
主要用途
细胞谷氨酸含量比色法定量检测试剂是一种旨在通过谷氨酸脱氢酶和黄递酶的酶偶联循环反应系统测定还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）还原碘硝基四唑紫（INT）的产量，即采用比色法测定其还原后峰值的变化，进行测算样品中谷氨酸含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞裂解悬液样品（动物、人体、昆虫等）中谷氨酸含量的定量检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
L-谷氨酸（L-Glutamic acid）是构成人体蛋白质所必需的20种氨基酸之一。L-谷氨酸普遍存在于自然界生态系统，成为氮代谢循环的主要受体，是人体细胞代谢中的关键化合物，也是重要的神经介质，在长时增效（long term potentiation；LTP）方面具有重要作用，并与学习和记忆机制相关。在谷氨酸脱氢酶（glutamate dehydrogenase）和黄递酶（diaphorase）的酶偶联循环反应系统中，L-谷氨酸受到氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（oxidized nicotinamide adenine dinucleotide；NAD+）的氧化，产生2-酮戊二酸（2-oxoglutarate）、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced Nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）和氨离子；进一步还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原碘硝基四唑紫（iodonitrotetrazolium chloride；INT）为甲簪（Formazan）。通过分光光度仪（492nm 波长），来定量分析谷氨酸的含量。其反应方式为：
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
裂解液（Reagent B） 毫升
缓冲液（Reagent C） 毫升
反应液（Reagent D） 毫升
阴性液（Reagent E） 毫升
酶促液I（Reagent F） 微升
酶促液II（Reagent G） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存反应液（Reagent D）、酶促液I（Reagent F）和酶促液II（Reagent G）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，反应液（Reagent D）避免光照；有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于样品制备和保存的容器
15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器
细胞刮脱棒：用于细胞脱离
（微型）台式离心机：用于样品操作
比色皿或96孔板：用于比色的容器
分光光度仪或酶标仪：用于比色分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的反应液（Reagent D）、酶促液I（Reagent F）和酶促液II（Reagent G）置入冰槽里融化。反应液（Reagent D）避免光照。同时设定好分光光度仪（温度为25℃）：波长492nm，并置零。然后进行下列操作。
一、 样品准备
1． 准备好25cm2细胞培养瓶或60mm细胞培养皿的待测培养细胞（1至5 X 106细胞）
2． 小心加入XX毫升清理液（Reagent A），覆盖生长表面
3． 小心抽去清理液
4． 使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞（注意：可以使用胰酶消化）
5． 加入XX毫升清理液（Reagent A），混匀细胞
6． 移入到预冷的15毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始）
7． 放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为300g
8． 小心抽去上清液
9． 加入XX微升裂解液（Reagent B），充分混匀
10． 转移到预冷的1.5毫升离心管
11． 强力涡旋震荡15秒
12． 置于冰槽里孵育30分钟
13． 放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
14． 小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管
15． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
16． 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作
二、 背景对照测定
1． 移取XX微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入XX微升阴性液（Reagent E）
3． 加入XX微升反应液（Reagent D）
4． 加入XX微升酶促液I（Reagent F）
5． 上下倾倒数次，混匀
6． 室温下（温度为25℃）静置2分钟，避免光照
7． （选择步骤）放进分光光度仪，置零
8． （选择步骤）取出比色皿
9． 加入XX微升酶促液II（Reagent G）
10． 上下倾倒数次，混匀
11． 室温下（温度为25℃）静置10分钟，避免光照
12． 即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照
三、 样品测定
1． 移取XX微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入50微升上述制备的待测样品（注意：100微克总蛋白；样品须清澈）
3． 加入XX微升反应液（Reagent D）
4． 加入XX微升酶促液I（Reagent F）
5． 上下倾倒数次，混匀
6． 室温下（温度为25℃）静置2分钟，避免光照
7． （选择步骤）放进分光光度仪，置零
8． （选择步骤）取出比色皿
9． 加入XX微升酶促液II（Reagent G）
10． 上下倾倒数次，混匀
11． 室温下（温度为25℃）静置10分钟，避免光照
12． 即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数
五、 计算样品浓度
六、 酶标仪测定
1． 在96孔板上做好相应标记：背景对照和待测样品
2． 分别移取XX微升缓冲液（Reagent C）到相应孔里
3． 按下表分别加入
|
| 背景对照孔 | 待测样品孔 |
| 阴性液（Reagent E） | XX微升 | ―― |
| 待测样品 | ―― | XX微升（XX微克总蛋白） |
| 反应液（Reagent D） | XX微升 | XX微升 |
| 酶促液I（Reagent F） | XX微升 | XX微升 |
4． 轻轻摇动96孔板，混匀
5． 室温下（温度为25℃）静置2分钟，避免光照
6． 分别加入XX微升酶促液II（Reagent G）
7． 轻轻摇动96孔板，混匀
8． 室温下（温度为25℃）静置10分钟，避免光照
9． 即刻放进酶标仪检测，此为背景空对照和样品读数
10． 浓度计算：
注意事项
1． 本产品为21次操作，包括背景对照
2． 操作时，须戴手套
3． 本产品检测范围在0至10微克/毫升（0至75微摩尔）谷氨酸
4． 建议样品须澄清（去色、去脂、去蛋白、去气体等）；本公司提供谷氨酸待测样品处理试剂盒－G&VS19033.7
5． 系统操作过程中，背景测定只需1次
6． 样品须澄清，至关重要
7． 样品中含有高浓度抗坏血酸（L-ascorbic acid）、半胱氨酸（cysteine）和亚硫酸（sulphite）等，会干扰检测，建议使用谷氨酸待测样品处理试剂盒（G&VS19033.7）去除干扰成分
8． 反应10分钟后比色测定值趋于稳定；测定值由低到高变化
9． 比色测定后，比色皿须清洗彻底
10． 建议待测样本蛋白浓度为100微克/50微升（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
11． 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
12． 本公司提供系列谷氨酸检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS19033.8 细胞谷氨酸含量比色法定量检测试剂盒 20次
G&VS19033.8A 清理液（Reagent A） 100毫升
G&VS19033.8B 裂解液（Reagent B） 10毫升
G&VS19033.8C 缓冲液（Reagent C） 100毫升
G&VS19033.8D 反应液（Reagent D） 10毫升
G&VS19033.8E 阴性液（Reagent E） 10毫升
G&VS19033.8F 酶促液I（Reagent F） 1毫升
G&VS19033.8G 酶促液II（Reagent G） 1毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS19033.1 | 果菜谷氨酸含量比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19033.2 | 乳品谷氨酸含量比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19033.3 | 食物谷氨酸含量比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19033.4 | 调料谷氨酸含量比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19033.5 | 细胞培养基谷氨酸含量比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19033.6 | 真菌/酵母谷氨酸含量比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19033.7 | 谷氨酸待测样品处理试剂盒 | 20次 |
| G&VS19033.8 | 细胞谷氨酸比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19033.9 | 组织谷氨酸比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
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