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发布时间：2026/11/4 16:36:39 阅读次数：4
真菌/酵母谷氨酰胺比色法定量检测试剂盒产品说明书
主要用途
真菌/酵母谷氨酰胺比色法定量检测试剂是一种旨在通过谷氨酰胺酶和谷氨酸脱氢酶的双酶循环反应系统测定食物添加剂萃取样品中的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADPH）的消耗量，即采用比色法测定其氧化后峰值的变化，进行测算谷氨酰胺含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种真菌/酵母细胞裂解悬液样品中谷氨酰胺的检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
L-谷氨酰胺（L-glutamine）是构成人体蛋白质所必需的20种氨基酸之一，是人体内最普遍的、不可缺乏的条件性必需氨基酸，是构成蛋白质不可缺少的氨基酸之一，更是某些细胞培养中最基本的元素。L-谷氨酰胺普遍存在于自然界生态系统，成为氮代谢循环的主要受体，尤其是真菌和植物共生作用，也是biomass产生的主要供体。在谷氨酰胺酶（Glutaminase）和谷氨酸脱氢酶（Glutamic dehydrogenase）的酶偶联循环反应系统中，L-谷氨酰胺首先发生脱氨基反应，产生谷氨酸（glutamic acid）和氨离子；进一步氨与2-酮戊二酸（2-oxoglutarate）反应再次产生谷氨酸，同时将还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（reduced Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate；NADPH）氧化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（oxidized nicotinamide adenine dinucleotide phosphate；NADP+），即测定NADPH（340nm 波长）的浓度变化，来定量分析谷氨酰胺的含量。其反应方式为：
产品内容
裂解液（Reagent A） 毫升
强化液（Reagent B） 毫升
缓冲液（Reagent C） 毫升
反应液（Reagent D） 微升
阴性液（Reagent E） 毫升
酶促液I（Reagent F） 微升
酶促液II（Reagent G） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存反应液（Reagent D）、酶促液I（Reagent F）和酶促液II（Reagent G）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；反应液（Reagent D）避免光照；有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于样品制备和保存的容器
15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器
（微型）台式离心机：用于样品操作
比色皿或酶标板：用于比色的容器
分光光度仪或酶标仪：用于比色分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的反应液（Reagent D）、酶促液I（Reagent F）和酶促液II（Reagent G）置入冰槽里融化。同时设定好分光光度仪（温度为25℃）：波长340nm，并置零。然后进行下列操作。
一、 样品准备（注意：参见注意事项4）
1． 准备好10毫升待测的新鲜真菌/酵母细胞（OD600＝0.4至0.8，即1至2 X 107细胞/毫升）
2． 移入到预冷的15毫升锥形离心管
3． 置于冰槽里5分钟
4． 放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为1000g
5． 小心抽去上清液
6． 加入xx微升裂解液（Reagent A），充分混匀
7． 转移到预冷的1.5毫升离心管
8． 加入xx微升强化液（Reagent B）
9． 强力涡旋震荡15秒
10． 置于冰槽里1分钟
11． 重复实验步骤9至10五次
12． 加入xx微升裂解液（Reagent A），充分混匀
13． 放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
14． 小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管
15． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
16． 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作
二、 背景对照测定
1． 移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入xx微升阴性液（Reagent E）
3． 加入xx微升酶促液I（Reagent F）
4． 上下倾倒数次，混匀
5． 室温下（温度为25℃）静置5分钟
6． 放进分光光度仪，置零
7． 取出比色皿
8． 加入xx微升反应液（Reagent D）
9． 上下倾倒数次，混匀
10． 室温下（温度为25℃）静置5分钟，避免光照
11． 即刻放进分光光度仪测读（此为初始读数）
12． 加入xx微升酶促液II（Reagent G）
13． 上下倾倒数次，混匀
14． 室温下（温度为25℃）静置5分钟，避免光照
15． 即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照（此为终点读数）
16． 实际读数（初始读数－终点读数）：此为背景空对照实际读数
三、 样品总含量测定
1． 移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入25微升上述制备的待测样品（注意：100微克总蛋白；样品须清澈）
3． 加入xx微升酶促液I（Reagent F）
4． 上下倾倒数次，混匀
5． 室温下（温度为25℃）静置5分钟
6． 放进分光光度仪，置零
7． 取出比色皿
8． 加入xx微升反应液（Reagent D）
9． 上下倾倒数次，混匀
10． 室温下（温度为25℃）静置5分钟，避免光照
11． 即刻放进分光光度仪测读（此为初始读数）
12． 加入xx微升酶促液II（Reagent G）
13． 上下倾倒数次，混匀
14． 室温下（温度为25℃）静置5分钟，避免光照
15． 即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数（此为终点读数）
16． 实际读数（初始读数－终点读数）：此为样品总含量读数
四、 样品非特异含量测定
1． 移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 加入25微升上述制备的待测样品（注意：100微克总蛋白；样品须清澈）
3． 加入xx微升阴性液（Reagent E）
4． 上下倾倒数次，混匀
5． 室温下（温度为25℃）静置5分钟
6． 放进分光光度仪，置零
7． 取出比色皿
8． 加入xx微升反应液（Reagent D）
9． 上下倾倒数次，混匀
10． 室温下（温度为25℃）静置5分钟，避免光照
11． 即刻放进分光光度仪测读（此为初始读数）
12． 加入xx微升酶促液II（Reagent G）
13． 上下倾倒数次，混匀
14． 室温下（温度为25℃）静置5分钟，避免光照
15． 即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数（此为终点读数）
16． 实际读数（初始读数－终点读数）：此为样品非特异含量读数
五、 计算样品浓度
六、 酶标板测定
1． 在96孔酶标板上做好相应标记：背景对照、样品总含量、样品非特异含量
2． 分别移取xx微升缓冲液（Reagent C）到相应孔中
3． 按下表分别加入：
|
| 背景对照孔 | 样品总含量孔 | 样品非特异含量孔 |
| 阴性液（Reagent E） | xx微升 | ―― | 5微升 |
| 待测样品 | ―― | xx微升（100微克总蛋白） | xx微升（100微克总蛋白） |
| 酶促液I（Reagent F） | xx微升 | xx微升 | ―― |
4． 轻轻摇动酶标板，混匀
5． 室温下（温度为25℃）静置5分钟，避免光照
6． 放进分光光度仪，置零
7． 取出酶标板
8． 分别加入xx微升反应液（Reagent D）
9． 轻轻摇动酶标板，混匀
10． 室温下（温度为25℃）静置5分钟，避免光照
11． 即刻放进酶标仪测读（此为初始读数）
12． 取出酶标板，分别加入xx微升酶促液II（Reagent G）
13． 轻轻摇动酶标板，混匀
14． 室温下（温度为25℃）静置5分钟，避免光照
15． 即刻放进酶标仪检测，此为背景空对照和样品读数（此为终点读数）
16． 实际读数：初始读数－终点读数
17． 浓度计算：
注意事项
1． 本产品为21次（10个样本）操作，包括背景对照
2． 操作时，须戴手套
3． 本产品检测范围在0至50微克/毫升（0至350微摩尔）谷氨酰胺
4． 建议样品须澄清（去色、去脂、去蛋白、去气体等）；本公司提供谷氨酰胺待测样品处理试剂盒－G&VS19027.7
5． 系统操作过程中，背景测定只需1次
6． 样品须澄清，至关重要
7． 强化液（Reagent B）为固体状，移取方法为：使用1毫升枪头，将尖端部分剪去；或使用0.5毫升PCR管的盖子内圈盛满；或秤重0.1克
8． 反应5分钟后比色测定值趋于稳定；测定值由高到低变化；如果仍有波动，建议适当延长检测时间，直至读数稳定
9． 比色测定后，比色皿须清洗彻底
10． 建议待测样本蛋白浓度为100微克/25微升（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
11． 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
12． 本公司提供系列营养学元素检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组份订购信息
编号 名称 规格
G&VS19027.6 真菌/酵母谷氨酰胺比色法定量检测试剂盒 20次
G&VS19027.6A 裂解液（Reagent A） 毫升
G&VS19027.6B 强化液（Reagent B） 毫升
G&VS19027.6C 缓冲液（Reagent C） 毫升
G&VS19027.6D 反应液（Reagent D） 毫升
G&VS19027.6E 阴性液（Reagent E） 毫升
G&VS19027.6F 酶促液I（Reagent F） 毫升
G&VS19027.6G 酶促液II（Reagent G） 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS19027.1 | 细胞培养基谷氨酰胺比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19027.2 | 食物添加剂谷氨酰胺比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19027.3 | 果菜谷氨酰胺比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19027.4 | 饮料谷氨酰胺比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19027.5 | 面食谷氨酰胺比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19027.6 | 真菌/酵母谷氨酰胺比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19027.7 | 谷氨酰胺待测样品处理试剂盒 | 20次 |
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