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发布时间：2026/11/4 16:41:40 阅读次数：4
细菌乙醇比色法定量检测试剂盒产品说明书
主要用途
细菌乙醇比色法定量检测试剂是一种旨在通过乙醇脱氢酶和甲醛脱氢酶的酶偶联反应系统中，伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）的变化，即采用比色法测定其还原后峰值的变化，进行测算细菌裂解萃取样品中乙醇含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细菌菌株裂解萃取液样品中乙醇含量的检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。
技术背景
乙醇普遍存在于自然界生态系统，尤其是各种食品中。还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adenine dinucleotide；NADH）是糖酵解通路中被氧化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（oxidized nicotinamide adenine dinucleotide；NAD）而产生乙醇所必须的辅助因子，基于这一细胞生理学原理，通过乙醇脱氢酶（ethanol dehydrogenase）和甲醛脱氢酶（aldehyde dehydrogenase）反应体系，使乙醇氧化为乙醛，进一步氧化为乙酸，在这一过程中伴随的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸生成量的变化，即测定NADH（340nm 波长）的浓度，来定量分析乙醇的含量。其反应方式为：
产品内容
裂解液（Reagent A） 毫升
活性液（Reagent B） 微升
缓冲液（Reagent C） 毫升
反应液（Reagent D） 毫升
阴性液（Reagent E） 毫升
酶促液I（Reagent F） 微升
酶促液II（Reagent G） 微升
产品说明书 1份
保存方式
保存活性液（Reagent B）、反应液（Reagent D）、酶促液I（Reagent F）和酶促液II（Reagent G）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
微型台式离心机：用于样品操作
比色皿或酶标板：用于比色的容器
分光光度仪或酶标仪：用于比色分析
实验步骤
一、 样品准备
1． 准备好500微升待测细菌（OD600＝0.4至0.8，即1至2 X 107细胞/毫升）
2． 转移到到1.5毫升离心管
3． 放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为1000g（或3500RPM，例如EPPENDORF 5415）
4． 小心抽去上清液
5． 加入xx微升裂解液（Reagent A），充分混匀
6． 加入xx微升活性液（Reagent B）
7． 强力涡旋震荡15秒
8． 置于冰槽里15分钟
9． 放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
10． 小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管
11． 移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
12． 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作
二、 测定准备
1． 准备好待测样品（例如细菌裂解萃取液等），置于冰槽里
2． 设定好分光光度仪（温度为25℃）：波长340nm，并置零
3． 实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的反应液（Reagent D）、酶促液I（Reagent F）和酶促液II（Reagent G）置入冰槽里融化。缓冲液（Reagent C）室温下均衡温度
三、 背景对照测定
1． 移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 放进分光光度仪，置零
3． 取出比色皿，加入xx微升反应液（Reagent D）
4． 加入xx微升阴性液（Reagent E）
5． 加入xx微升酶促液I（Reagent F）
6． 上下倾倒数次，混匀
7． 室温下（温度为25℃）静置2分钟，避免光照
8． 即刻放进分光光度仪测读（此为初始读数）
9． 加入xx微升酶促液II（Reagent G）
10． 上下倾倒数次，混匀
11． 室温下（温度为25℃）静置5分钟，避免光照
12． 即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照（此为终点读数）
13． 实际读数（终点读数－初始读数）：此为背景空对照实际读数
四、 样品测定
1． 移取xx微升缓冲液（Reagent C）到新的比色皿
2． 放进分光光度仪，置零
3． 加入xx微升反应液（Reagent D）
4． 加入100微升（100微克总蛋白）上述制备的待测样品（注意：样品须清澈）
5． 加入xx微升酶促液I（Reagent F）
6． 上下倾倒数次，混匀
7． 室温下（温度为25℃）静置2分钟，避免光照
8． 即刻放进分光光度仪测读（此为初始读数）
9． 加入xx微升酶促液II（Reagent G）
10． 上下倾倒数次，混匀
11． 室温下（温度为25℃）静置5分钟，避免光照
12． 即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数（此为终点读数）
13． 实际读数（终点读数－初始读数）：此为样品实际读数
五、 计算样品浓度
六、 酶标板测定
1． 在96孔酶标板上做好相应标记：背景对照和样品
2． 分别移取xx微升缓冲液（Reagent C）到相应孔中
3． 分别加入xx微升反应液（Reagent D）
4． 分别加入xx微升阴性液（Reagent E）或待测样品（注意：50微克总蛋白；样品须清澈）
5． 分别加入xx微升酶促液I（Reagent F）
6． 轻轻摇动酶标板
7． 室温下（温度为25℃）静置2分钟，避免光照
8． 即刻放进分光光度仪测读（此为初始读数）
9． 分别加入xx微升酶促液II（Reagent G）
10． 轻轻摇动酶标板
11． 室温下（温度为25℃）静置5分钟，避免光照
12． 即刻放进分光光度仪测读（此为终点读数）
13． 实际读数＝终点读数－初始读数：包括背景和样品实际读数
14． 浓度计算：
注意事项
1． 本产品为20次（比色皿）和80次（酶标板）操作，包括背景对照
2． 本产品检测范围在0至12微克/毫升乙醇
3． 建议使用比色皿检测
4． 操作时，须戴手套
5． 实验所用的器皿，避免酒精污染
6． 系统操作过程中，背景测定只需1次
7． 样品须澄清，至关重要
8． 加样后即刻比色测定
9． 反应5分钟后比色测定值趋于稳定；测定值由低到高变化
10． 比色测定后，比色皿须清洗彻底
11． 建议待测样本的蛋白浓度为100微克/100微升（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒G&VS30030.1）
12． 如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度
13． 本公司提供系列乙醇检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
编号 名称 规格
G&VS19021.7 细菌乙醇比色法定量检测试剂盒 20/80次
G&VS19021.7A 裂解液（Reagent A） 毫升
G&VS19021.7B 活性液（Reagent B） 毫升
G&VS19021.7C 缓冲液（Reagent C） 毫升
G&VS19021.7D 反应液（Reagent D） 毫升
G&VS19021.7E 阴性液（Reagent E） 毫升
G&VS19021.7F 酶促液I（Reagent F） 毫升
G&VS19021.7G 酶促液II（Reagent G） 毫升
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS19021.1 | 酒类乙醇比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19021.2 | 乳品乙醇比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19021.3 | 饮料乙醇比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19021.4 | 调料乙醇比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19021.5 | 细胞乙醇比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19021.6 | 组织乙醇比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19021.7 | 细菌乙醇比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19021.8 | 乙醇待测样品处理试剂盒 | 20次 |
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