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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

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组织非蛋白/游离巯基含量比色法定量检测试剂盒产品说明书

发布时间：2026/11/5 8:16:43 阅读次数：3

组织非蛋白/游离巯基含量比色法定量检测试剂盒产品说明书

主要用途

组织非蛋白/游离巯基含量比色法定量检测试剂是一种旨在通过三氯醋酸预处理后，使用Ellman试剂，与溶液中的非蛋白/游离巯基基团包括DTT等特异性结合反应，产生黄色5-巯基-2-硝基苯甲酸产物，出现吸光峰值的变化，即采用比色法来测定样品中非蛋白/游离巯基含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物和人体组织裂解样品中非蛋白/游离巯基含量检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

巯基（sulfyhydryl或thiol或mercaptans）是一种有机化学的功能性基团（-SH），由硫原子和氢原子组成。巯基是氨基酸中的半胱氨酸里的重要功能基团，在生物系统中起着重要的作用。其产生的二硫键构成蛋白质的二级结构、活性部位、金属原子结合作用等的重要因子。Ellman引入5,5-二硫基-双（2-硝基苯甲酸）[5,5’-dithiobis-（2-nitrobenzoic acid）；DTNB]，与巯基的特异性结合反应，产生混合巯基和黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸（5-thio-2-nitrobenzoic acid；TNB），用于定量检测溶液中的巯基。基于DTNB的特性，通过产物吸光峰值的变化（412nm波长），来定量分析样品中巯基的总含量。其反应系统为：

产品内容

分离液（Reagent A）毫升

缓冲液（Reagent B）毫升

反应液（Reagent C）毫升

阴性液（Reagent D）毫升

清理液（Reagent E）毫升

裂解液（Reagent F）毫升

产品说明书 1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里；反应液（Reagent C）避免光照；有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于样品预处理的容器

微型台式离心机：用于样品操作

200微升1厘米光径比色皿或96孔板：用于比色的容器

分光光度仪或酶标仪：用于比色分析

实验步骤

一、样品准备

1．准备好新鲜的动物组织，并秤重以确定100毫克组织重量

2．（选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管

3．（选择步骤）加入xx毫升清理液（Reagent E）清洗1次

4．即刻用刀片切碎组织

5．放进一个预冷的15毫升锥形离心管

6．加入预冷的xx毫升裂解液（Reagent F）

7．涡旋震荡5秒，充分混匀

8．即刻放进预冷的DOUNCE匀浆器，在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约80下）

9．将所有组织匀浆物移入1.5毫升离心管，放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g

10．小心移出上清液到新的1.5毫升离心管

11．移取10微升进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）

12．（选择步骤）放进－70℃的冰箱里保存或置于冰槽里备用

13．移取50微升（总量100微克蛋白）上述制备的待测样品到1.5毫升离心管

14．加入50微升分离液（Reagent A），混匀

15．放进微型台式离心机离心15分钟，速度为300g（或1500rpm，例如EPPENDORF 5415D）

16．小心移取上清液到新的1.5毫升离心管

17．置于冰槽里备用

二、 测定准备

1．准备好待测样品，置于冰槽里备用

2．开启并设定好分光光度仪（温度为37℃）：波长412nm，并置零

3．从－20℃冰箱里取出试剂，置于冰槽里融化；反应液（Reagent C）避免光照

4． 缓冲液（Reagent B）室温下均衡温度

三、 背景对照测定

1．移取xx微升缓冲液（Reagent B）到新的比色皿

2．加入xx微升阴性液（Reagent D）

3．加入xx微升反应液（Reagent C）

4．上下倾倒数次，混匀

5．室温下孵育15分钟，避免光照

6．即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照

四、 样品测定

1．移取xx微升缓冲液（Reagent B）到新的比色皿

2．加入50微升（蛋白总量50微克）待测样品（注意：样品须清澈）

3．加入xx微升反应液（Reagent C）

4．上下倾倒数次，混匀

5．室温下孵育15分钟，避免光照

6．即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数

五、计算样品含量

六、酶标仪测定

1．在96孔板上做好相应标记：背景对照和样品

2．分别移取xx微升缓冲液（Reagent B）到96孔板里

3．分别加入xx微升阴性液（Reagent D）或待测样品（蛋白总量50微克）到相应孔里（注意：样品须清澈）

4．分别加入xx微升反应液（Reagent C）

5．轻轻摇动96孔板

6．室温下孵育15分钟，避免光照

7．即刻放进酶标仪检测

8．含量计算

注意事项

1．本产品为20次操作，包括背景对照

2．本产品检测范围为0.05至1毫摩尔/升巯基

3．操作时，须戴手套

4．样品处理过程中，避免使用DTT、巯基乙醇等

5．系统操作过程中，背景测定只需1次

6．建议使用比色皿测定

7．样品须澄清，至关重要

8．测定值由低到高变化

9．比色测定后，比色皿须清洗彻底

10．建议待测样本蛋白浓度不宜超过1毫克/毫升（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）

11．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度

12．本公司提供系列巯基检测试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组分订购信息

编号名称规格

G&VS19076.2.3 组织非蛋白/游离巯基含量比色法定量检测试剂盒 20次

G&VS19076.2.3A 分离液（Reagent A）毫升

G&VS19076.2.3B 缓冲液（Reagent B）毫升

G&VS19076.2.3C 反应液（Reagent C）毫升

G&VS19076.2.3D 阴性液（Reagent D）毫升

G&VS19076.2.3E 清理液（Reagent E）毫升

G&VS19076.2.3F 裂解液（Reagent F）毫升

试剂盒订购信息

产品编号	名称	规格
G&VS19076.2.1	通用型非蛋白/游离巯基含量比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS19076.2.2	细胞非蛋白/游离巯基含量比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS19076.2.3	组织非蛋白/游离巯基含量比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS19076.2.4	体液非蛋白/游离巯基含量比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS19076.2.5	植物非蛋白/游离巯基含量比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS19076.2.6	真菌/酵母非蛋白/游离巯基含量比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS19076.2.7	细菌非蛋白/游离巯基含量比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS19197.2.1	通用型非蛋白/游离巯基含量荧光定量检测试剂盒	20次
G&VS19197.2.2	细胞非蛋白/游离巯基含量荧光定量检测试剂盒	20次
G&VS19197.2.3	组织非蛋白/游离巯基含量荧光定量检测试剂盒	20次
G&VS19197.2.4	体液非蛋白/游离巯基含量荧光定量检测试剂盒	20次
G&VS19197.2.5	植物非蛋白/游离巯基含量荧光定量检测试剂盒	20次
G&VS19197.2.6	真菌/酵母非蛋白/游离巯基含量荧光定量检测试剂盒	20次
G&VS19197.2.7	细菌非蛋白/游离巯基含量荧光定量检测试剂盒	20次