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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

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蛋白巯基/结合巯基含量比色法定量检测试剂盒产品说明书

发布时间：2026/11/5 8:26:50 阅读次数：2

主要用途

蛋白巯基/结合巯基含量比色法定量检测试剂是一种旨在通过三氯醋酸预处理后，使用Ellman 试剂，与溶液中巯基基团特异性结合反应，产生黄色 5-巯基-2-硝基苯甲酸产物，出现吸光峰值的变化，即采用比色法来测定样品中蛋白巯基/结合巯基含量的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物和人体细胞、组织、血液、体液、细胞培养上清等溶液样品中蛋白巯基/结合巯基含量检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

巯基(sulfyhydryl或thiol或mercaptans)是一种有机化学的功能性基团(-SH)，由硫原子和氢原子组成。巯基是氨基酸中的半胱氨酸里的重要功能基团，在生物系统中起着重要的作用。其产生的二硫键构成蛋白质的二级结构、活性部位、金属原子结合作用等的重要因子。 Ellman引入5，5-二硫基-双(2-硝基苯甲酸) [5， 5’-dithiobis- (2-nitrobenzoic acid)；DTNB]，与巯基的特异性结合反应，产生混合巯基和黄色的5-巯基-2-硝基苯甲酸(5-thio-2-nitrobenzoic acid；TNB)，用于定量检测溶液中的巯基。基于DTNB的特性，通过产物吸光峰值的变化(412nm波长)，来定量分析样品中巯基的总含量。其反应系统为：

产品内容

分离液(Reagent A)

缓冲液(Reagent B)

反应液(Reagent C)

阴性液(Reagent D)

产品说明书

保存方式

保存在－20C冰箱里；反应液(Reagent C)避免光照；有效保证 6 月

用户自备

1.5 毫升离心管：用于样品预处理的容器

微型台式离心机：用于样品操作

比色皿或酶标板：用于比色的容器

分光光度仪或酶标仪：用于比色分析

实验步骤

一、样品准备

1)游离巯基样品制备

1. 移取 50 微升待测样品到 1.5 毫升离心管

2. 加入 xx 微升分离液(Reagent A)，混匀

3. 放进微型台式离心机离心 15 分钟，速度为 300g(或 1500rpm，例如 EPPENDORF 5415D)

4. 小心移取上清液到新的 1.5 毫升离心管，标记为游离巯基

5. 置于冰槽里备用

2) 总巯基样品制备

1．移取 50 微升待测样品到 1.5 毫升离心管

2．加入 xx 微升缓冲液(Reagent B)，混匀，标记为总巯基

3．置于冰槽里备用

二、测定准备

1 ．准备好待测样品，置于冰槽里备用

2 ．开启并设定好分光光度仪(温度为 37C)：波长 412nm，并置零

3 ．从－20C冰箱里取出试剂，置于冰槽里融化；反应液(Reagent C) 避免光照

三、背景对照测定

1 ．移取 xx 微升缓冲液(Reagent B) 到新的比色皿

2 ．加入 xx 微升阴性液(Reagent D)

3 ．加入 xx 微升反应液(Reagent C)

4 ．上下倾倒数次，混匀

5 ．室温下孵育 15 分钟，避免光照

6 ．即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照

四、样品测定

1．分别移取 xx 微升缓冲液(Reagent B) 到新的比色皿

2．分别加入 xx 微升上述制备的未分离总巯基待测和分离游离巯基待测样品(注意： 样品须清澈)

3．分别加入 xx 微升反应液(Reagent C)

4．上下倾倒数次，混匀

5．室温下孵育 15 分钟，避免光照

6．即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数

五、计算样品含量

1) 总巯基和游离巯基含量计算

2) 蛋白巯基/结合巯基含量计算

总巯基含量—游离巯基含量

六、酶标板测定

1 ．在 96 孔酶标板上做好相应标记：背景对照、未分离总巯基待测样品、分离游离巯基待测样品

2 ．分别移取 xx 微升缓冲液(Reagent B) 到 96 孔板中

3 ．分别加入 xx 微升阴性液(Reagent D)、总巯基待测样品和游离巯基待测样品到相应孔中(注意： 样品须清澈)

4 ．分别加入 xx 微升反应液(Reagent C)

5 ．轻轻摇动 96 孔酶标板

6 ．室温下孵育 15 分钟，避免光照

7 ．即刻放进酶标仪检测

8 ．含量计算

1) 总巯基和游离巯基含量计算

2) 蛋白巯基/结合巯基含量计算

总巯基含量—游离巯基含量

注意事项

1 ．本产品为 20 次操作，包括背景对照

2 ．本产品检测范围为 0.05 至 1 毫摩尔巯基

3 ．操作时，须戴手套

4 ．样品处理过程中，避免使用 DTT、巯基乙醇等

5 ．系统操作过程中，背景测定只需 1 次

6 ．建议使用比色皿测定

7 ．样品须澄清，至关重要

8 ．测定值由低到高变化

9 ．比色测定后，比色皿须清洗彻底

10．建议待测样本蛋白浓度不宜超过 1 毫克/毫升(本公司提供 Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030. 1)

11．如果待测样品浓度过高或过低，可以调整样品浓度

12．本公司提供系列巯基检测试剂产品

质量标准

1 ．本产品经鉴定性能稳定

2 ．本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式(实验报告) 与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

编号	名称	规格
G&VS19076.3	蛋白巯基/结合巯基含量比色法定量检测试剂盒	20 次
G&VS19076.3A	分离液(Reagent A)	50 毫升
G&VS19076.3B	缓冲液(Reagent B)	50 毫升
G&VS19076.3C	反应液(Reagent C)	5 毫升
G&VS19076.3D	阴性液(Reagent D)	5 毫升

产品编号	名称	规格
G&VS19076. 1	总巯基含量比色法定量检测试剂盒	20 次
G&VS19076.2	非蛋白/游离巯基含量比色法定量检测试剂盒	20 次
G&VS19076.3	蛋白巯基/结合巯基含量比色法定量检测试剂盒	20 次