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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

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通用型维生素 E 高效液相色谱法定量检测试剂盒产品说明书

发布时间：2026/11/5 8:29:15 阅读次数：2

主要用途

通用型维生素 E 高效液相色谱法定量检测试剂是一种旨在通过有机溶剂萃取，必要时皂化处理，进而在高效液相色谱仪和紫外光谱下(294nm 波长)检测分析，分离出可溶性维生素 E 波峰，以定量测定样品中α-生育酚的含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种油类、植物、蔬菜、食品、血液等样品中维生素 E 的检测(包括α、β、γ、δ形式)。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

维生素E (vitaminE)，又称为生育酚(tocophenol；TCP)，是一种由各种甲基化的酚类构成的有机化合物，为脂溶性抗氧化剂。维生素E分成8种形式：4种生育酚， 4种生育三烯酚(Tocotrienols)，分别有α、β、γ、δ。其中α-生育酚是维生素E中最具活性，也是最常见代表，在食物添加剂的国际命名上标记为E307成年人的建议日摄入用量是15毫克。维生素E在植物、藻类等合成，而不能在动物中产生。维生素E在麦类、素油、水果、果仁、鱼、蔬菜等中含量丰富，包括棕榈油、橄榄油、豆油、奶油花生等。维生素E具有预防自发流产、增强免疫功能、防止未饱和脂肪酸、低密度脂蛋白和细胞膜的氧化、清除自由基、预防冠心病等作用。维生素E缺乏将导致神经性疾患，例如脊髓小脑性共济失调(spinocerebellar ataxia)、肌病(myopathies)、贫血等。通过有机溶剂萃取，必要时进行皂化处理，排除脂类、蛋白和碳水化合物的干扰，进而在高效液相色谱仪和紫外光谱下(294nm波长)检测分析，分离出可溶性维生素E波峰，以定量α-生育酚的含量。

产品内容

处理液(Reagent A)

皂化液(Reagent B)

酸性液(Reagent C)

萃取液(Reagent D)

溶解液(Reagent E)

流相液(Reagent F)

标准液(Reagent G)

产品说明书

保存方式

保存在 4℃冰箱里，避免光照；试剂具有挥发性，注意密闭瓶盖；皂化液(Reagent B) 和酸性液(Reagent C)具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证 6 月

用户自备

1.5 毫升离心管：用于样品处理和标准液配制的容器

15 毫升锥形离心管：用于样品处理的容器

(微型)台式离心机：用于样品处理

DOUNCE 匀浆器：用于裂解样品

恒温水槽或培养箱：用于样品反应孵育和晾干

高效液相色谱仪(HPLC)：用于定量测定

实验步骤

一、样品准备

1)固态样品准备

1．秤取 50 毫克待测固态样品

2．移入到一个液氮冻存管

3．即刻放进液氮罐过夜

4．次日从液氮罐里取出，即刻(最快速度)碾碎组织成粉末(注意： 切莫使样品冻融)

5．加入 xx 微升处理液(Reagent A)

6．全部转移到 DOUNCE 匀浆器

7．用匀浆棒匀化组织(约 80 下)

8．全部转移到 1.5 毫升离心管

9．放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 16000g (或 13000RPM，例如 eppendorf 5415)

10．小心移取上清液到 15 毫升锥形离心管

11．再加入 xx 微升处理液(Reagent A) 到含有沉淀颗粒的 1.5 毫升离心管中

12．涡旋震荡 1 分钟

13．放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 16000g (或 13000RPM，例如 eppendorf 5415)

14．小心移取上清液合并到上述 15 毫升锥形离心管中(总量 1 毫升)

15．(选择步骤)加入 xx 毫升皂化液(Reagent B)

16．(选择步骤)涡旋震荡 15 秒

17．(选择步骤)放进 70℃恒温水槽孵育 30 分钟，其间每隔 10 分钟涡旋震荡 5 秒一次

18．(选择步骤)置于冰槽里冷却 1 分钟

19．(选择步骤)加入 xx 毫升酸性液(Reagent C)，混匀

20．加入 xx 毫升萃取液(Reagent D)

21．强力涡旋震荡 15 秒

22．重复实验步骤 21 二次

23．放进台式离心机离心 10 分钟，速度为 1300g

24．移取上层液相到新的 15 毫升锥形离心管

25．放进 40℃干式培养箱晾干

26．加入 xx 微升 30℃预热的溶解液(Reagent E)，混匀

27．即刻进行高效液相色谱分析(注意：如果暂时保存，建议在 4℃不超过 48 小时； -20℃不超过 3 月)

2)固态样品准备

1．移取 500 微升待测液态样品到 1.5 毫升离心管

2．加入 xx 微升处理液(Reagent A)

3．涡旋震荡 1 分钟

4．放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 16000g (或 13000RPM，例如 eppendorf 5415)

5．小心移取上清液到 15 毫升锥形离心管中

6． (选择步骤)加入 xx 毫升皂化液(Reagent B)

7． (选择步骤)涡旋震荡 15 秒

8． (选择步骤)放进 70℃恒温水槽孵育 30 分钟，其间每隔 10 分钟涡旋震荡 5 秒一次

9． (选择步骤)置于冰槽里冷却 1 分钟

10．(选择步骤)加入 xx 毫升酸性液(Reagent C)，混匀

11．加入 xx 毫升萃取液(Reagent D)

12．强力涡旋震荡 15 秒

13．重复实验步骤 12 二次

14．放进台式离心机离心 10 分钟，速度为 1300g

15．移取上层液相到新的 15 毫升锥形离心管

16．放进 40℃干式培养箱晾干

17．加入 xx 微升 30℃预热的溶解液(Reagent E)，混匀，避光

18．即刻进行高效液相色谱分析(注意：如果暂时保存，建议在 4℃不超过 48 小时； -20℃不超过 3 月)

二、测定准备

1．开启仪器预热 15 分钟

2．根据下表设置高效液相色谱仪(HPLC)参数

参数	推荐一	推荐二	推荐三	补充说明
色谱柱	长度： 25cm 直径： 4.6mm	长度： 15cm 直径： 3.9mm	长度： 12.5cm 直径： 4.0mm	Waters 仪器或 Agilent 仪器
固定相	ODS	ODS	ODS
流动相	流相液(Reagent F)
流速	1 毫升/分钟	1 毫升/分钟	1 毫升/分钟
注射容量	xx 微升	xx 微升	xx 微升	10 微升至 100 微升
检测	紫外	紫外	紫外
波长	294nm	294nm	294nm	290 至 300nm
柱温	40℃	40℃	40℃	25 至 45℃
峰值时间(retention)	5 分钟	16 分钟	10 分钟	参考
运行时间	10 分钟	20 分钟	15 分钟	参考

3．使用流相液(Reagent F) 运行 1 次(xx 毫升)，以达到色谱柱均衡和温度稳定

三、标准样品配制

1．准备好 5 个 1.5 毫升离心管，标记为 1 至 5 号管

2．分别加入 xx 微升溶解液(Reagent E) 到 1 至 5 号管

3．移取 xx 微升标准液(Reagent G) 到 1 号管，混匀

4．小心移取 xx 微升 1 号管稀释的标准液(Reagent G) 到 2 号管，混匀

5．小心移取 xx 微升 2 号管稀释的标准液(Reagent G) 到 3 号管，混匀

6．小心移取 xx 微升 3 号管稀释的标准液(Reagent G) 到 4 号管，混匀

7．将 1 至 5 号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

管号	溶解液(Reagent E)	标准液(Reagent G)	标准α-生育酚浓度
1	xx 微升	xx 微升	20 微克/毫升
2	xx 微升	xx 微升 1 号管	10 微克/毫升
3	xx 微升	xx 微升 2 号管	5 微克/毫升
4	xx 微升	xx 微升 3 号管	2.5 微克/毫升
5	xx 微升	xx	0

四、色谱分析

1．将上述配制的标准液(Reagent G) 和待测样品放进 30℃培养箱预热

2．每次(每个样品)注射 20 微升

3．每次(每个样品)运行 10 至 20 分钟

4．获得色谱波峰图：波峰面积(peak area )或峰值，保存记录

5．全部运行完成，使用适量的流相液(Reagent F) 清洗色谱柱

五、计算含量

1．方法一：通过仪器中的软件进行测算

2．方法二：构建标准曲线：纵座标(Y 轴) 为波峰面积(peak area )；横座标(X 轴) 为标准α-生育酚浓度(微克/毫升)，根据标准曲线获得样品对应α-生育酚浓度(微克/毫升)

3．方法三：公式计算(选择单一浓度的标准液)

样本α-生育酚浓度(微克/毫升) = 【样本波峰面积(peak area ) X 标准α-生育酚浓度】 ÷对应标准α-生育酚浓度的波峰面积

注意事项

1 ．本产品为 20 次操作

2 ．本产品可以用于β、γ、δ-生育酚的检测

3 ．本产品检测范围是 0.3 至 50 毫克/升

4 ．操作时，须戴手套

5 ．试剂具有挥发性，注意密闭瓶盖或使用封口膜

6 ．如果样品中脂类含量高，建议皂化处理

7 ．皂化液(Reagent B) 和酸性液(Reagent C) 具有腐蚀性，注意操作安全

8 ．建议使用溶解液(Reagent E) 作为阴性对照或作为基准线

9 ．色谱柱的异物残留、气泡产生、温度未达均衡等将导致异常波峰、时间偏移等

10．用户可以使用已知浓度的标准液加入到样品中，然后进行萃取，检测回收率(recovery)

11．α -生育酚的 HPLC 参考图谱如下

12．α -生育酚的出峰时间(retention)以用户操作时，使用的标准液(Reagent G)实际出峰为准

13．本公司提供系列维生素检测试剂产品

质量标准

1 ．本产品经鉴定性能稳定

2 ．本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式(实验报告) 与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

编号	名称	规格
G&VS19071.2. 1	通用型维生素 E 高效液相色谱法定量检测试剂盒	20 次
G&VS19071.2. 1A	处理液(Reagent A)	100 毫升
G&VS19071.2. 1B	皂化液(Reagent B)	100 毫升
G&VS19071.2. 1C	酸性液(Reagent C)	100 毫升
G&VS19071.2. 1D	萃取液(Reagent D)	100 毫升
G&VS19071.2. 1E	溶解液(Reagent E)	100 毫升
G&VS19071.2. 1F	流相液(Reagent F)	500 毫升
G&VS19071.2. 1G	标准液(Reagent G)	10 毫升
产品编号	名称	规格
G&VS19071. 1	维生素 E 比色法定量检测试剂盒	20 次
G&VS19071.2. 1	通用型维生素 E 高效液相色谱法定量检测试剂盒	20 次
G&VS19071.2.2	血液维生素 E 高效液相色谱法定量检测试剂盒	20 次

G&VS19071.2.3	尿液维生素 E 高效液相色谱法定量检测试剂盒	20 次
G&VS19071.2.4	奶品维生素 E 高效液相色谱法定量检测试剂盒	20 次
G&VS19071.2.5	植物维生素 E 高效液相色谱法定量检测试剂盒	20 次
G&VS19071.2.6	藻类维生素 E 高效液相色谱法定量检测试剂盒	20 次
G&VS19071.2.7	油类维生素 E 高效液相色谱法定量检测试剂盒	20 次