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发布时间：2026/11/5 8:30:02 阅读次数：3
细胞铁含量比色法定量检测试剂盒产品说明书
主要用途
细胞铁含量比色法定量检测试剂是一种旨在通过无机酸消解处理后，释放出游离铁离子，还原后，二价铁离子与邻菲啰啉反应，产生橘红色螯合物，由分光光度仪比色分析，定量检测细胞样品总铁含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种细胞（动物、人体等）裂解悬液样品中铁的总含量检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测准确。
技术背景
铁（iron）是人体所需的矿物素，碘（iodine）为动物和人体必需矿物素，分成三价铁和二价铁。三价铁先被还原使之与有机配位体分离，分离出来的二价铁被生物体吸收。动物和人体的整个消化道都可以吸收，植物在根尖处吸收。机体大约有三分之二的铁存在于红细胞的血红蛋白和肌肉的肌红蛋白中，20％的铁以不同形式存在于肝、脾和其他组织中，包括铁蛋白（ferritin）和血铁黄蛋白（hemosiderin）。铁作为氧的载体，保证组织内氧的正常输送，在细胞生物氧化和能量代谢、DNA合成过程中发挥着重要作用。铁缺失，将导致疲倦、贫血等症状。邻菲啰啉（Phenanthroline）法铁含量检测是较为常用的方法之一。首先通过无机酸消解，释放铁离子，进而还原处理，全部转化为二价铁。二价铁离子与邻菲啰啉反应，产生橘红色螯合物，通过分光光度仪（508nm波长）检测，产生吸光峰值的增高，来测定铁的总含量。
产品内容
清理液（Reagent A） 毫升
裂解液（Reagent B） 毫升
处理液（Reagent C） 毫升
中和液（Reagent D） 毫升
还原液（Reagent E） 毫升
显色液（Reagent F） 毫升
稳定液（Reagent G） 毫升
标准液（Reagent H） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存还原液（Reagent E）和显色液（Reagent F）在—20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在4℃冰箱里；处理液（Reagent C）和中和液（Reagent D）具有腐蚀性，严格注意操作安全；有效保证6月
用户自备
1.5毫升离心管：用于样品操作的容器
100℃水槽：用于反应孵育
细胞刮脱棒：用于细胞脱离
微型台式离心机：用于样品操作
3毫升比色皿：用于比色分析的容器
分光光度仪：用于比色分析
实验步骤
一、样品准备
1． 准备好75cm2细胞培养瓶或100mm细胞培养皿的待测培养细胞（1至5 X 107细胞）
2． 小心加入xx毫升清理液（Reagent A），覆盖生长表面
3． 小心抽去清理液
4． 使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞（注意：可以使用胰酶消化）
5． 加入xx毫升清理液（Reagent A），混匀细胞
6． 移入到预冷的15毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始）
7． 放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为300g
8． 小心抽去上清液
9． 加入xx微升裂解液（Reagent B），充分混匀
10． 转移到预冷的1.5毫升离心管
11． 强力涡旋震荡15秒
12． 置于冰槽里孵育30分钟
13． 放进4℃微型台式离心机离心5分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）
14． 小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管——作为蛋白定量检测之用
15． 移取10微升上清液进行蛋白定量检测（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）
16． 即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作
二、标准样品配制
1． 准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管
2． 分别加入xx微升清理液（Reagent A）到1至5号管
3． 移取xx微升标准液（Reagent H）到1号管，混匀
4． 小心移取xx微升1号管稀释的标准液（Reagent H）到2号管，混匀
5． 小心移取xx微升2号管稀释的标准液（Reagent H）到3号管，混匀
6． 小心移取xx微升3号管稀释的标准液（Reagent H）到4号管，混匀
7． 将1至5号管放进冰槽里备用；标准管浓度见下表
| 管号 | 清理液（Reagent A） | 标准液（Reagent H） | 标准铁浓度 |
| 1 | xx微升 | xx微升 | xx毫摩尔/升 |
| 2 | xx微升 | xx微升1号管 | xx毫摩尔/升 |
| 3 | xx微升 | xx微升2号管 | xx毫摩尔/升 |
| 4 | xx微升 | xx微升3号管 | xx毫摩尔/升 |
| 5 | xx微升 | 0 | 0 |
三、 标准曲线测定
1． 移取xx微升上述配制的标准液（Reagent H）到新的1.5毫升离心管
2． 加入xx微升处理液（Reagent C），混匀
3． 置于100℃温度下孵育60分钟（注意：避免液体蒸发干枯）
4． 置于室温下30分钟冷却
5． 再移取其中xx微升处理过的标准液（Reagent H）到比色皿
6． 加入xx微升中和液（Reagent D）
7． 加入xx微升还原液（Reagent E）
8． 加入xx毫升显色液（Reagent F）
9． 加入xx微升稳定液（Reagent G），混匀
10． 室温下孵育10分钟，避免光照
11． 即刻放进分光光度仪检测（波长508nm）：获得吸光读数
12． 重复实验步骤1至11四次
13． 构建标准曲线：纵座标（Y轴）为吸光读数；横座标（X轴）为标准铁含量（毫摩尔/升）
四、 样品测定
1． 移取xx微升上述配制的待测样品到新的1.5毫升离心管
2． 加入xx微升处理液（Reagent C），混匀
3． 置于100℃温度下孵育60分钟（注意：避免液体蒸发干枯）
4． 置于室温下30分钟冷却
5． 再移取其中500微升处理过的待测样品到比色皿
6． 加入xx微升中和液（Reagent D）
7． 加入xx微升还原液（Reagent E）
8． 加入xx毫升显色液（Reagent F）
9． 加入xx微升稳定液（Reagent G），混匀
10． 室温下孵育10分钟，避免光照
11． 即刻放进分光光度仪检测（波长508nm）：获得样品吸光读数
12． 根据标准曲线获得样品对应铁含量（毫摩尔/升）
五、 含量计算
1. 根据标准曲线获得样品对应铁含量（毫摩尔）X稀释倍数=（毫摩尔/升）
注意事项
1． 本产品为25次操作，包括标准样品
2． 操作时，须戴手套
3． 系统操作时，标准样品测定只需1次
4． 处理液（Reagent C）和中和液（Reagent D）具有腐蚀性，严格注意操作安全
5． 孵育时，避免光照
6． 通常铁含量表述为：毫摩尔/毫克蛋白；毫摩尔/毫升；毫摩尔/细胞总量
7． 本公司提供系列铁检测试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定检测敏感
使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
订购信息
单组分订购信息
编号 名称 规格
G&VS19072.1 细胞铁含量比色法定量检测试剂盒 20次
G&VS19072.1A 清理液（Reagent A） 毫升
G&VS19072.1B 裂解液（Reagent B） 毫升
G&VS19072.1C 处理液（Reagent C） 毫升
G&VS19072.1D 中和液（Reagent D） 毫升
G&VS19072.1E 还原液（Reagent E） 毫升
G&VS19072.1F 显色液（Reagent F） 毫升
G&VS19072.1G 稳定液（Reagent G） 毫升
G&VS19072.1H 标准液（Reagent H） 毫升
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 名称 | 规格 |
| G&VS19072.1 | 细胞铁含量比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19072.2 | 组织铁含量比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19072.3 | 体液铁含量比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19072.4 | 食物铁含量比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19072.5 | 乳制品铁含量比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19072.6 | 植物铁含量比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
| G&VS19072.7 | 水样品铁含量比色法定量检测试剂盒 | 20次 |
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