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通用型维生素B1高效液相色谱法定量检测试剂盒产品说明书

发布时间：2026/11/5 8:34:05 阅读次数：2

通用型维生素B1高效液相色谱法定量检测试剂盒产品说明书

主要用途

通用型维生素B1高效液相色谱法定量检测试剂是一种旨在通过沉淀去除干扰，然后进行氧化衍生化，进而在高效液相色谱仪和荧光光谱下检测分析，分离出维生素B1波峰，以定量测定样品中TDP的含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种食物、植物、细菌、酵母、体液、血液（动物、人体）等样品中维生素B1的检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

维生素B1（vitamin B1），又称为硫胺（thiamin），是一种B类复合物中的水溶性维生素，由嘧啶碱基（pyrimidine）和噻唑（thiazol）环通过亚甲桥（methylene bridge）链接而成。化学全名是2-[3-[(4-amino- 2-methyl- pyrimidin- 5-yl) methyl]- 4-methyl- thiazol- 5-yl] ethanol。其分子量为300.84，分子式为C12H17N4OS⁺Cl^-。维生素B1对于碱性溶液、氧化反应和还原反应敏感。维生素B1由植物和微生物产生，以游离、肽结合、磷酯（phospho-ester）形式存在。而人体和动物通过食物获得补充，在胃肠组织通过主动运输和被动弥散予以摄入。其体内代谢中的活化分子为焦磷酸硫胺（thiamine diphosphate/thiamine pyrophosphate；TDP）和三磷酸硫胺（thiamine triphosphate；TTP），作为碳水化合物、脂肪、醇类和氨基酸代谢（氧化羧基化反应；oxidative carboxylation）的主要辅酶。活化分子去磷酸化后，经肾脏排出。全血中的90%或红细胞中80%的维生素B1是TDP，因此检测血液中TDP含量成为体内维生素B1含量的主要指标。维生素B1缺乏，将导致脚气病（beriberi），而出现周围神经炎（peripheral neuritis）、肌无力、瘫痪和心血管系统症状。维生素B1的检测方法，首先沉淀去除大分子干扰，然后使用铁氰化钾（potassium ferricyanide），在碱性条件下，氧化硫胺及其衍生物为硫色素（thiochrome）衍生物，进而在高效液相色谱仪和荧光光谱仪下（激发波长365nm，散发波长440nm）检测分析，分离出维生素B1波峰，以定量维生素B1的含量。

产品内容

处理液（Reagent A）毫升

沉淀液（Reagent B）毫升

稀释液（Reagent C）毫升

碱性液（Reagent D）毫升

氧化液（Reagent E）毫升

流相液（Reagent F）毫升

标准液（Reagent G）毫升

产品说明书 1份

保存方式

保存稀释液（Reagent C）、氧化液（Reagent E）和标准液（Reagent G）在-20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，氧化液（Reagent E）避免光照；试剂具有挥发性，注意密闭瓶盖；沉淀液（Reagent B）、碱性液（Reagent C）、流相液（Reagent F）和标准液（Reagent G）具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证3月

用户自备

1.5毫升离心管：用于样品处理和标准液配制的容器

DOUNCE匀浆器：用于裂解样品

（微型）台式离心机：用于样品处理

恒温水槽或培养箱：用于样品反应孵育

高效液相色谱仪（HPLC）：用于定量测定

实验步骤

一、 样品准备

1）固态样品准备

1．秤取50毫克待测固态样品

2．移入到一个液氮冻存管

3．即刻放进液氮罐过夜

4．次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎组织成粉末（注意：切莫使样品冻融）

5．加入xx微升处理液（Reagent A）

6．全部转移到DOUNCE匀浆器

7．用匀浆棒匀化样品（约80下）

8．全部转移到1.5毫升离心管

9．加入xx微升沉淀液（Reagent B）

10．涡旋震荡1分钟

11． 4℃下孵育10分钟

12．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g

13．小心移取上清液到新的1.5毫升离心管

14．即刻进行后续衍生化和高效液相色谱分析（注意：如果暂时保存，建议在4℃不超过24小时；-20℃不超过3月）

2）液态样品准备

1．移取500微升待测液态样品到1.5毫升离心管

2．加入xx微升处理液（Reagent A）

3．涡旋震荡1分钟

4．加入xx微升沉淀液（Reagent B）

5．涡旋震荡1分钟

6． 4℃下孵育10分钟

7．放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g

8．小心移取上清液到新的1.5毫升离心管

9．即刻进行后续衍生化和高效液相色谱分析（注意：如果暂时保存，建议在4℃不超过24小时；-20℃不超过3月）

二、 测定准备

1．开启仪器预热15分钟

2．根据下表设置高效液相色谱仪（HPLC）参数

参数	推荐	补充说明
色谱柱	长度：12.5cm 直径：4.0mm	Waters仪器或 Agilent仪器
固定相	ODS
流动相	流相液（Reagent F）
流速	1毫升/分钟
注射容量	50微升	10微升至100微升
检测	荧光
波长	激发波长365nm，散发波长440nm
柱温	30℃
峰值时间（retention）	3.5分钟	参考
运行时间	12分钟	参考

3．使用流相液（Reagent F）运行1次（30毫升），以达到色谱柱均衡和温度稳定

三、 标准样品配制

1．准备好5个1.5毫升离心管，标记为1至5号管

2．分别加入xx微升稀释液（Reagent C）到1至5号管

3．移取xx微升标准液（Reagent G）到1号管，混匀

4．小心移取xx微升1号管稀释的标准液（Reagent G）到2号管，混匀

5．小心移取xx微升2号管稀释的标准液（Reagent G）到3号管，混匀

6．小心移取xx微升3号管稀释的标准液（Reagent G）到4号管，混匀

7．将1至5号管放进冰槽里备用，避免光照；标准管浓度见下表

管号	稀释液（Reagent C）	标准液（Reagent G）	标准TDP浓度
1	xx微升	xx微升	xx纳克/毫升
2	xx微升	xx微升1号管	xx纳克/毫升
3	xx微升	xx微升2号管	xx纳克/毫升
4	xx微升	xx微升3号管	xx纳克/毫升
5	xx微升	0	0

8．分别加入xx微升沉淀液（Reagent B）

9．分别涡旋震荡1分钟

10． 4℃下孵育10分钟

11．分别放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g

12．分别移取上清液到新的1.5毫升离心管

13．置于冰槽里备用

四、色谱分析

1．分别移取xx微升上述配制的标准液（Reagent G）和待测样品到新的1.5毫升离心管

2．分别加入xx微升碱性液（Reagent D）

3．分别加入xx微升氧化液（Reagent E），混匀

4．放进60℃培养箱孵育10分钟

5．置于冰槽里冷却5分钟

6．分别放进4℃微型台式离心机离心10分钟，速度为10000g

7．分别移取上清液到新的1.5毫升离心管（注意：须在72小时内完成测试）

8．每次（每个样品）注射50微升

9．每次（每个样品）运行12分钟

10．获得色谱波峰图：波峰面积（peak area）或峰值，保存记录

11．全部运行完成，使用30毫升无离子水清洗色谱柱

五、计算含量

1．方法一：通过仪器中的软件进行测算

2．方法二：构建标准曲线：纵座标（Y轴）为波峰面积（peak area）；横座标（X轴）为标准TDP浓度（纳克/毫升），根据标准曲线获得样品对应TDP浓度（纳克/毫升）

3．方法三：公式计算（选择单一浓度的标准液）

样本TDP浓度（纳克/毫升）=【样本波峰面积（peak area）X标准TDP浓度】÷对应标准TDP浓度的波峰面积

注意事项

1．本产品为20次操作

2．血浆或血清样品的TDP含量较低，建议使用全血样品为佳

3．本产品检测范围是0.5至250纳克/毫升

4．操作时，须戴手套

5．试剂具有挥发性，注意密闭瓶盖或使用封口膜

6．样品建议新鲜采集

7． 沉淀液（Reagent B）、碱性液（Reagent D）、流相液（Reagent F）和标准液（Reagent G）具有腐蚀性，注意操作安全

8．色谱柱的异物残留、气泡产生、温度未达均衡等将导致异常波峰、时间偏移等

9．用户可以使用已知浓度的标准液（Reagent G）作为内参标准加入到样品中，检测回收率（recovery）

10． TDP的HPLC参考图谱如下

11． TDP的出峰时间（retention）以用户操作时，使用的标准液（Reagent G）实际出峰为准

12．本公司提供系列维生素检测试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组份订购信息

编号名称规格

G&VS19067.2.1 通用型维生素B1高效液相色谱法定量检测试剂盒 20次

G&VS19067.2.1A 裂解液（Reagent A）毫升

G&VS19067.2.1B 沉淀液（Reagent B）毫升

G&VS19067.2.1C 稀释液（Reagent C）毫升

G&VS19067.2.1D 碱性液（Reagent D）毫升

G&VS19067.2.1E 氧化液（Reagent E）毫升

G&VS19067.2.1F 流相液（Reagent F）毫升

G&VS19067.2.1G 标准液（Reagent G） 1毫升

试剂盒订购信息

产品编号	名称	规格
G&VS19067.2.1	通用型维生素B1高效液相色谱法定量检测试剂盒	20次
G&VS19067.2.2	血液维生素B1高效液相色谱法定量检测试剂盒	20次
G&VS19067.2.3	食物维生素B1高效液相色谱法定量检测试剂盒	20次
G&VS19067.2.4	植物维生素B1高效液相色谱法定量检测试剂盒	20次
G&VS19067.2.5	细菌维生素B1高效液相色谱法定量检测试剂盒	20次
G&VS19067.2.6	酵母维生素B1高效液相色谱法定量检测试剂盒	20次
G&VS19067.2.7	体液维生素B1高效液相色谱法定量检测试剂盒	20次