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制备海藻糖含量酶连续反应光谱法定量检测试剂盒产品说明书

发布时间:2026/11/5 8:39:51      阅读次数:2

 

制备海藻糖含量酶连续反应光谱法定量检测试剂盒产品说明书

 

主要用途

制备海藻糖含量酶连续反应光谱法定量检测试剂是一种旨在通过海藻糖酶、己糖激酶和葡萄糖6-磷酸脱氢酶的酶连续反应系统中,伴随的氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)还原反应后吸光峰值的变化,即采用光谱法来测定样品中海藻糖含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种人工制备海藻糖含量的检测。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定。 

 

技术背景

海藻糖(trehalose)乳糖(lactose;milk sugar),和蔗糖、麦芽糖一样是一种自然产生的二糖,由2个葡萄糖分子通过α1,1-糖苷键链接而成。结构稳定,非还原性。在酸性环境或高温下,不宜水解。存在于蘑菇、蜂蜜、海鲜食物中,是生物体能量的来源,以及生物体冻存、干燥或热处理的稳定剂。同时作为甜味剂、稠厚剂、稳定剂、调味剂等,用于食品加工生产中。其分子式为C12H22O11,分子量是342.3。基于底物海藻糖,在海藻糖酶(trehalase)的水解下,产生2个分子葡萄糖,继而在己糖激酶的作用下,产生葡萄糖-6-磷酸产物后,通过葡萄糖6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase;G6PDH)反应系统中,伴随的氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(oxidized  nicotinamide adenine dinucleotide phosphate;NADP)转化为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate;NADPH),其吸光峰值的变化(340nm),来定量分析海藻糖的含量。其反应方式为:

 

产品内容

缓冲液(Reagent A)  毫升

酶解液(Reagent B)  毫升

反应液(Reagent C)  毫升

底物液(Reagent D)  毫升

产品说明书        1份

 

保存方式

保存在-20℃冰箱里;底物液(Reagent D)避免光照;有效保证6月

 

用户自备

无离子水:用于稀释样品

过滤纸:用于样品澄清处理

100毫升三角烧瓶:用于制备样品的容器

磁力搅拌仪:用于样品操作

培养箱:用于反应孵育

比色皿或酶标板:用于光谱测定的容器

分光光度仪或酶标仪:用于光谱测定分析

 

实验步骤

一、 (选择操作)样品准备(注意:参见注意事项6)

1. 秤取1克待测样品

2. 放进研磨器研磨成粉末

3. 移入到100毫升三角烧瓶

4. 加入40毫升80℃预热的无离子水

5. 磁力搅拌仪上搅拌15分钟,充分混匀

6. 室温下静置15分钟冷却

7. 过滤纸过滤 

8. 继续后续测定或放进4℃冰箱保存

 

二、 测定准备

1. 开启并设定好分光光度仪(温度为25℃):波长340nm,并置零 

2. 从-20℃冰箱里取出试剂,置于冰槽里融化;底物液(Reagent D)避免光照

3. 缓冲液(Reagent A)室温下均衡温度

 

三、 样品背景对照测定

1. 加入50微升待测样品到新的比色皿

2. 加入xx微升缓冲液(Reagent A)

3. 在25℃温度下孵育10分钟

4. 加入xx微升缓冲液(Reagent A)

5. 加入xx微升反应液(Reagent C)

6. 加入xx微升底物液(Reagent D)

7. 上下倾倒数次,混匀

8. 在25℃温度下孵育5分钟

9. 即刻放进分光光度仪检测,此为样品背景对照 

 

四、 样品测定

1. 加入50微升待测样品到新的比色皿

2. 加入xx微升酶解液(Reagent B),混匀

3. 在25℃温度下孵育10分钟

4. 加入xx微升缓冲液(Reagent A)

5. 加入xx微升反应液(Reagent C)

6. 加入xx微升底物液(Reagent D)

7. 上下倾倒数次,混匀

8. 在25℃温度下孵育5分钟

9. 即刻放进分光光度仪检测,此为样品读数 

 

五、计算样品浓度

[(样品读数-背景读数)X 1(体系容量;毫升)X样品稀释倍数]÷[0.05(样品容量;毫升)X 6.22(毫摩尔吸光系数)X 2]=微摩尔海藻糖/毫升÷(样品重量)毫克/毫升=微摩尔海藻糖/毫克

 

六、 酶孔板测定

1. 在96孔板上做好相应标记:样品背景对照和待测样品

2. 分别移取10微升待测样品到所有孔里

3. 加入xx微升酶解液(Reagent B)到待测样品孔里

4. 加入xx微升缓冲液(Reagent A)到样品背景对照孔里

5. 轻轻摇动96孔板

6. 在25℃温度下10分钟

7. 分别加入xx微升缓冲液(Reagent A)到所有孔里

8. 分别加入xx微升反应液(Reagent C)

9. 分别加入xx微升底物液(Reagent D)

10. 轻轻摇动96孔板

11. 在25℃温度下孵育5分钟

12. 即刻放进酶标仪检测 

13. 浓度计算

 

注意事项

1. 本产品为20次(比色皿)和80次(96孔板)操作

2. 本产品检测范围为1至80微克/毫升

3. 操作时,须戴手套

4. 建议使用比色皿测定

5. 样品须澄清,至关重要 

6. 建议样品须澄清(去色、去脂、去蛋白、去气体等);本公司提供海藻糖待测样品处理试剂盒-G&VS19060.5

7. 光谱测定后,比色皿须清洗彻底

8. 测定值由低到高变化,表明样品海藻糖阳性

9. 反应5分钟后光谱测定值趋于稳定;如果仍有波动,建议适当延长检测时间,直至读数稳定

10. 如果待测样品浓度过高或过低,可以调整样品浓度

11. 本公司提供系列海藻糖检测试剂产品

 

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定

2. 本产品经鉴定检测敏感

 

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后,应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告)与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致,本公司不承担由此造成的损失。

 

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK, RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

 

订购信息

编号               名称                    规格

G&VS19060.4    制备海藻糖含量酶连续反应光谱法定量检测试剂盒   20次

G&VS19060.4A    缓冲液(Reagent A)                    100毫升

G&VS19060.4B     酶解液(Reagent B)                     10毫升

G&VS19060.4C     反应液(Reagent C)                     10毫升

G&VS19060.4D    底物液(Reagent D)                 10毫升

 

产品编号

名称

规格

G&VS19060.1

海鲜食物海藻糖含量酶连续反应光谱法定量检测试剂盒

20次

G&VS19060.2

蜂蜜海藻糖含量酶连续反应光谱法定量检测试剂盒

20次

G&VS19060.3

蘑菇海藻糖含量酶连续反应光谱法定量检测试剂盒

20次

G&VS19060.4

制备海藻糖含量酶连续反应光谱法定量检测试剂盒

20次

G&VS19060.5

海藻糖待测样品处理试剂盒

20次

 


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