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革兰氏阴性细菌外膜囊泡制备试剂盒产品说明书

发布时间：2024/7/4 9:00:12 阅读次数：121

主要用途
革兰氏阴性细菌外膜囊泡制备试剂是一种旨在使用差速离心，分离并收集所有细胞外膜囊泡的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种革兰氏阴性细菌外膜囊泡及其蛋白的纯化。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，萃取产量和纯度皆佳。

技术背景
外膜囊泡（outer membrane vesicle；OMV）为含有周质内容物（包括外膜蛋白、DNA 、RNA 、脂多糖、脂质、周质蛋白、黏附素、免疫调节化合物等）的球形电子致密芽状体（spherical bud），细胞外间隔体，双层磷脂，20 至 200 纳米大小，来自于革兰氏阴性细菌周边突起物的释放形成或胞外分泌产物，使之与环境或宿主细胞进行反应，并调解各种功能，包括促进病理形成，调节细菌互动，转运各种信号分子（例如 DNA、 RNA 、蛋白质、内毒素、毒力因子等），保护细菌生存、结合和侵入，引起毒性，产生抗生素抗性等。外膜囊泡的产量取决于细菌生长周期、营养条件、温度、氧化应激状态等。病原菌的外膜囊泡 10 倍于非病原菌体。外膜囊泡具有疫苗开发中免疫调节潜力。通过差速离心和蛋白酶抑制混合剂，获得高纯外膜囊泡，充分保留其蛋白质的免疫和生物学活性。

产品内容
保存液（Reagent A）                         毫升
溶解液（Reagent B）                         毫升
活性液（Reagent C）                         微升
产品说明书                                         1 份

保存方式
保存活性液（Reagent C）在-20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里，有效保证 6 月

用户自备
50 毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
1.5 毫升离心管：用于样品保存的容器
分光光度仪：用于测定细菌浓度
台式离心机：用于样品操作
超速离心机：用于样品操作
恒温摇床：用于培养细菌细胞
0.45 微米滤膜：用于样品操作
真空浓缩装置：用于样品操作

实验步骤
实验开始前，将试剂盒里的活性液（Reagent C）从－20℃的冰箱里取出，置入冰槽里冻融，然后移出 xx 毫升溶解液（Reagent B）到 1.5 毫升离心管，加入 xx 微升活性液（Reagent C），充分混匀，置于冰槽里，标记为溶解工作液。然后进行下列操作。

1．准备好 1 毫升过夜培养的新鲜细菌样品
2．移取 500 微升到 50 毫升细菌培养液（注意：用户可以进行诱导培养，例如无铁培养等） 3 ．放进 37℃恒温摇床孵育过夜，速度为 200RPM
4．在分光光度仪上测 OD600为 1（1 OD ＝1 X 109 细胞/毫升；总量为 5 X 1010 细胞）
5．转移到预冷的 50 毫升锥形离心管
6．放进 4℃台式离心机离心 30 分钟，速度为 5000g
7．小心移取上清液到新的 50 毫升锥形离心管
8．重复实验步骤 6 和 7 一次
9．使用 0.45 微米滤膜真空过滤一次
10．（选择步骤）使用 100kD 蛋白临界点浓缩处理（例如 Millipore centriplus YM100） 11．放进 4℃超速离心机离心 3 小时，速度为 150000g
12．小心抽去上清液
13．加入 xx 微升预冷的保存液（Reagent A）
14．或加入 xx 微升预冷的含有溶解液（Reagent B）和活性液（Reagent C）的溶解工作液 15 ．用枪头上下抽吸，充分混匀
16．转移到新的预冷的 1.5 毫升离心管
17．即刻放进－70℃冰箱里保存或置于冰槽里备用
18．进行后续蛋白定量、荧光定量或电镜检测等

注意事项
1．本产品为 20 次（50 毫升菌液）操作
2．所有操作须在 4℃状态下进行
3．建议使用新鲜细菌接种，培养到指数生长阶段为理想状态
4．溶解液（Reagent B）为淡乳白色
5．活性液（Reagent C）避免反复冻融
6．本产品按照 50 毫升培养菌液配制。如果操作不同菌液容量，可相应调整试剂用量 7 ．根据菌种不同，50 毫升（OD600 ＝1）菌液可获得 5 至 100 微克外膜囊泡蛋白
8．制备产物如果放在－70℃冰箱里储存备用，严格避免反复冻融
9．本公司提供系列细菌试剂产品

质量标准
1．本产品经鉴定性能稳定
2．本产品经鉴定无蛋白酶污染

使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺” 的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组份订购信息

编号                                                  名称                                              规格
G&VS30022.5              革兰氏阴性细菌外膜囊泡制备试剂盒                 20 次
G&VS30022.5A                      保存液（Reagent A）                               毫升
G&VS30022.5B                      溶解液（Reagent B）                               毫升
G&VS30022.5C                      活性液（Reagent C）                               微升

试剂盒订购信息
产品编号                                      名称                                                         规格
G&VS30022.1   细菌可溶性总蛋白制备试剂盒                                           20 次
G&VS30022.2   细菌可溶性膜蛋白制备试剂盒                                            20 次
G&VS30022.3   革兰氏阴性细菌外膜蛋白制备试剂盒                                  20 次
G&VS30022.4   革兰氏阴性细菌内膜蛋白制备试剂盒                                  20 次
G&VS30022.5   革兰氏阴性细菌外膜囊泡制备试剂盒                                20 次
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