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革兰氏阴性细菌外膜囊泡制备试剂盒产品说明书

发布时间:2024/7/4 9:00:12      阅读次数:13

主要用途
革兰氏阴性细菌外膜囊泡制备试剂是一种旨在使用差速离心,分离并收集所有细胞外膜囊泡的权威而经典 的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种革兰氏阴性细菌外膜囊泡及其蛋白的纯 化。产品即到即用,性能稳定,操作便捷,萃取产量和纯度皆佳。

技术背景
外膜囊泡(outer membrane vesicle;OMV)为含有周质内容物(包括外膜蛋白、DNA 、RNA 、脂多糖、脂 质、周质蛋白、黏附素、免疫调节化合物等)的球形电子致密芽状体(spherical bud),细胞外间隔体,双 层磷脂,20 至 200 纳米大小,来自于革兰氏阴性细菌周边突起物的释放形成或胞外分泌产物,使之与环境 或宿主细胞进行反应,并调解各种功能,包括促进病理形成,调节细菌互动,转运各种信号分子(例如 DNA、 RNA 、蛋白质、内毒素、毒力因子等),保护细菌生存、结合和侵入,引起毒性,产生抗生素抗性等。外膜 囊泡的产量取决于细菌生长周期、营养条件、温度、氧化应激状态等。病原菌的外膜囊泡 10 倍于非病原菌 体。外膜囊泡具有疫苗开发中免疫调节潜力。通过差速离心和蛋白酶抑制混合剂,获得高纯外膜囊泡,充 分保留其蛋白质的免疫和生物学活性。


产品内容                         
保存液(Reagent A)                         毫升
溶解液(Reagent B)                         毫升
活性液(Reagent C)                         微升
产品说明书                                         1 份

保存方式
保存活性液(Reagent C)在-20℃冰箱里,其余的保存在 4℃冰箱里,有效保证 6 月

用户自备
50 毫升锥形离心管:用于样品操作的容器
1.5 毫升离心管:用于样品保存的容器
分光光度仪:用于测定细菌浓度
台式离心机:用于样品操作
超速离心机:用于样品操作
恒温摇床:用于培养细菌细胞
0.45 微米滤膜:用于样品操作
真空浓缩装置:用于样品操作

实验步骤
实验开始前,将试剂盒里的活性液(Reagent C)从-20℃的冰箱里取出,置入冰槽里冻融,然后移出 xx  毫升溶解液(Reagent B)到 1.5 毫升离心管,加入 xx 微升活性液(Reagent C),充分混匀,置于冰槽里, 标记为溶解工作液。然后进行下列操作。

1.准备好 1 毫升过夜培养的新鲜细菌样品
2.移取 500 微升到 50 毫升细菌培养液(注意:用户可以进行诱导培养,例如无铁培养等) 3 . 放进 37℃恒温摇床孵育过夜,速度为 200RPM
4.在分光光度仪上测 OD600为 1(1 OD =1 X 109 细胞/毫升;总量为 5 X 1010 细胞)
5.转移到预冷的 50 毫升锥形离心管
6.放进 4℃台式离心机离心 30 分钟,速度为 5000g
7.小心移取上清液到新的 50 毫升锥形离心管
8.重复实验步骤 6 和 7 一次
9.使用 0.45 微米滤膜真空过滤一次
10.(选择步骤)使用 100kD 蛋白临界点浓缩处理(例如 Millipore centriplus YM100) 11.放进 4℃超速离心机离心 3 小时,速度为 150000g
12.小心抽去上清液
13.加入 xx 微升预冷的保存液(Reagent A)
14.或加入 xx 微升预冷的含有溶解液(Reagent B)和活性液(Reagent C)的溶解工作液 15 .用枪头上下抽吸,充分混匀
16.转移到新的预冷的 1.5 毫升离心管
17.即刻放进-70℃冰箱里保存或置于冰槽里备用
18.进行后续蛋白定量、荧光定量或电镜检测等

注意事项
1.本产品为 20 次(50 毫升菌液)操作
2.所有操作须在 4℃状态下进行
3.建议使用新鲜细菌接种,培养到指数生长阶段为理想状态
4.溶解液(Reagent B)为淡乳白色
5.活性液(Reagent C)避免反复冻融
6.本产品按照 50 毫升培养菌液配制。如果操作不同菌液容量,可相应调整试剂用量 7 . 根据菌种不同,50 毫升(OD600 =1)菌液可获得 5 至 100 微克外膜囊泡蛋白
8.制备产物如果放在-70℃冰箱里储存备用,严格避免反复冻融
9.本公司提供系列细菌试剂产品

质量标准
1.本产品经鉴定性能稳定
2.本产品经鉴定无蛋白酶污染

使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺” 的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后, 应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证 说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告) 与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作 所致,本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK , RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组份订购信息

编号                                                  名称                                                规格
G&VS30022.5              革兰氏阴性细菌外膜囊泡制备试剂盒                 20 次
G&VS30022.5A                      保存液(Reagent A)                               毫升
G&VS30022.5B                      溶解液(Reagent B)                               毫升
G&VS30022.5C                      活性液(Reagent C)                               微升

试剂盒订购信息
产品编号                                      名称                                                         规格
G&VS30022.1    细菌可溶性总蛋白制备试剂盒                                           20 次
G&VS30022.2    细菌可溶性膜蛋白制备试剂盒                                            20 次
G&VS30022.3    革兰氏阴性细菌外膜蛋白制备试剂盒                                  20 次
G&VS30022.4    革兰氏阴性细菌内膜蛋白制备试剂盒                                  20 次
G&VS30022.5    革兰氏阴性细菌外膜囊泡制备试剂盒                                  20 次
G&VS30022.6    革兰氏阴性细菌外膜囊泡高纯制备试剂盒                           20 次
G&VS10547    革兰氏阴性细菌外膜囊泡荧光(FM4-64)定量检测试剂盒   20 次
G&VS10548    革兰氏阴性细菌外膜囊泡比色法定量检测试剂盒                    20 次
G&VS10549    革兰氏阴性细菌外膜囊泡光度法(PA-TBA)定量检测试剂盒   20 次


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