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核糖体（ribosome）RNA 解离试剂盒产品说明书

发布时间：2024/7/4 9:29:14 阅读次数：111

主要用途
核糖体（ribosome）RNA 解离试剂是一种旨在通过化学方法，解离核糖体 RNA 分子，充分灭活 RNA 酶，以及有机溶剂有效萃取的技术处理，以获得不含蛋白质的纯度最佳的核糖体 RNA 的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞或组织样品（人体、动物、植物等）的核糖体 RNA 提取。产物可以直接用于 Northern 杂交、斑点杂交、体外翻译、RT-PCR、构建cDNA 文库等各种后续分子生物学实验。产品即到即用，性能稳定，无核酶污染，操作简便，产物纯度高，重复性好。

技术背景
核糖体（ribosome）是一种细小颗粒的核糖蛋白复合物（ribonucleoprotein complex），生命细胞制造蛋白质的非膜性结构元素和转译装置（translational apparatus），由RNA和蛋白质组成，具有多肽转移酶的活性。其分成2个亚体：大亚体和小亚体。核糖体通过大亚体结合转运核糖体（tRNA），而小亚体结合信使RNA（mRNA），然后阅读RNA提供的信息，转译（translation）成氨基酸，连接成蛋白分子。真核生物的核糖体位于胞质（游离核糖体）、线粒体和叶绿体中。其中胞浆核糖体为80S核糖体，分子量为4.2MDs ，由40S 小亚体和60S大亚体组成：60S由5S RNA 、28S RNA 、5.8S亚基和49个蛋白组成；而40S由18S RNA和33个蛋白组成。线粒体和叶绿体核糖体与原核生物相似，为70S核糖体，分子量为2.7MDs ，由30S小亚体和50S 大亚体组成：50S包括5S、23S RNA和34个蛋白；30S包括16S RNA和21个蛋白。原核生物的核糖体RNA和蛋白质重量之比为2:1 ，而真核生物为1:1 。核糖体在镁离子和冰醋酸的作用下，RNA和蛋白质分子分离，
进而通过异硫氰酸胍（guanidine isothiocyanate）快速灭活RNA酶。同时在新鲜的β-巯基乙醇(β-Mercapto   ethanol）的参与下，阻止RNA酶分子间二硫键的重新形成。在酸性环境下，酚氯仿的结合，使RNA与残余蛋白和DNA彻底分离。

产品内容
解离液（Reagent A）                   20 毫升
清理液（Reagent B）                   20 毫升
萃取液（Reagent C）                   20 毫升
沉淀液（Reagent D）                   10 毫升
净化液（Reagent E）                   20 毫升
保存液（Reagent F）                    1 毫升
产品说明书                                    1 份

保存方式
保存萃取液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里，有效保证 6 月

用户自备
1.5 毫升离心管：用于样品操作的容器
4℃微型台式离心机：用于样品操作
涡旋震荡仪：用于混匀

实验步骤
1 ．准备好 1 至 5 毫克纯化核糖体颗粒
2 ．（选择步骤）加入 1 毫升预冷的解离液（Reagent A）
3 ．（选择步骤）涡旋震荡 15 秒
4 ．（选择步骤）置于冰槽里孵育 30 分钟
5 ．（选择步骤）放进 4℃微型台式离心机离心 15 分钟，速度为 16000g
6 ．（选择步骤）小心移取上清液到新的 1.5 毫升离心管（注意：可以用于后续蛋白样品分析）
7 ．加入 1 毫升预冷的清理液（Reagent B），混匀颗粒群
8 ．加入 1 毫升萃取液（Reagent C）
9 ．强力涡旋震荡 30 秒
10 ．置于冰槽里孵育 15 分钟
11．放进 4℃微型台式离心机离心 15 分钟，速度为 16000g
12 ．小心移取 1 毫升上层液相溶液到新的预冷的 1.5 毫升离心管，留下（丢弃）25 微升相位交界面的溶液
13 ．加入 500 微升沉淀液（Reagent D），混匀
14 ．置于－20℃冰箱里，孵育 15 分钟
15 ．放进 4℃微型台式离心机离心 15 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM ，例如 eppendorf 5415） 16 ．小心抽去上清液
17 ．加入 1 毫升净化液（Reagent E）
18 ．放进 4℃微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM ，例如 eppendorf 5415） 19 ．小心抽去上清液
20 ．空气中晾干
21 ．加入 50 微升保存液（Reagent F）
22 ．放进－70℃冰箱里储存备用

注意事项
1 ．本产品为 20 次操作
2 ．整个操作须在 4℃状态下进行
3 ．整个操作须带手套
4 ．建议使用滤芯枪头，并格外小心，防止降解 RNA
5 ．建议所有的操作用品属于 RNA 专用
6 ．通常 1 克核糖体样品可以提取 200 至 500 微克 RNA 量
7 ．RNA 浓度测定（纳克/微升）=OD260 X 1000 X 4 (1:100 稀释)；如果稀释倍数 1:200 ，则系数为 8；稀释倍数 1:400 ，则系数为 16
8 ．纯化的 RNA 保存在－70℃冰箱里，避免反复冻融
9 ．本公司提供系列核糖体制备产品

质量标准
1 ．本产品经鉴定性能稳定
2 ．本产品经鉴定无核酶成分
3 ．本产品经鉴定纯化程度高

使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺” 的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息
编号                           名称                                              规格
G&VS10413   核糖体（ribosome）RNA 解离试剂盒   20 次
G&VS10413A   解离液（Reagent A）                    100 毫升
G&VS10413B   清理液（Reagent B）                        100 毫升
G&VS10413C   萃取液（Reagent C）                        100 毫升
G&VS10413D   沉淀液（Reagent D）                  500 毫升
G&VS10413E   清理液（Reagent E）                        500 毫升
G&VS10413F   保存液（Reagent F）                        10 毫升

试剂盒订购信息
产品编号                                     名称                                                              规格
G&VS10409. 1   动物细胞/组织胞质核糖体（ribosome）分离试剂盒              10 次
G&VS10409.2   动物细胞/组织线粒体核糖体（ribosome）分离试剂盒              10 次
G&VS10409.3   动物细胞/组织总核糖体（ribosome）分离试剂盒                     10 次
G&VS10410   动物细胞/组织纯化核糖体（ribosome）蛋白质萃取试剂盒       20 次
G&VS10411       80S 核糖体（ribosome）解离试剂盒                                        10 次
G&VS10412       70S 核糖体（ribosome）解离试剂盒                                        10 次
G&VS10413    核糖体（ribosome）RNA 解离试剂盒                                       10 次