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核糖体(ribosome)RNA 解离试剂盒产品说明书

发布时间:2024/7/4 9:29:14      阅读次数:10

主要用途
核糖体(ribosome)RNA 解离试剂是一种旨在通过化学方法,解离核糖体 RNA 分子,充分灭活 RNA 酶, 以及有机溶剂有效萃取的技术处理,以获得不含蛋白质的纯度最佳的核糖体 RNA 的权威而经典的技术方 法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种细胞或组织样品(人体、动物、植物等)的核 糖体 RNA 提取。产物可以直接用于 Northern 杂交、斑点杂交、体外翻译、RT-PCR、构建cDNA 文库等各 种后续分子生物学实验。产品即到即用,性能稳定,无核酶污染,操作简便,产物纯度高,重复性好。

技术背景
核糖体(ribosome)是一种细小颗粒的核糖蛋白复合物(ribonucleoprotein complex),生命细胞制造蛋白质 的非膜性结构元素和转译装置(translational apparatus),由RNA和蛋白质组成,具有多肽转移酶的活性。其 分成2个亚体:大亚体和小亚体。核糖体通过大亚体结合转运核糖体(tRNA),而小亚体结合信使RNA(mRNA),然后阅读RNA提供的信息,转译(translation)成氨基酸,连接成蛋白分子。真核生物的核糖 体位于胞质(游离核糖体)、线粒体和叶绿体中。其中胞浆核糖体为80S核糖体,分子量为4.2MDs ,由40S  小亚体和60S大亚体组成:60S由5S RNA 、28S RNA 、5.8S亚基和49个蛋白组成;而40S由18S RNA和33个 蛋白组成。线粒体和叶绿体核糖体与原核生物相似,为70S核糖体,分子量为2.7MDs ,由30S小亚体和50S  大亚体组成:50S包括5S、23S RNA和34个蛋白;30S包括16S RNA和21个蛋白。原核生物的核糖体RNA和 蛋白质重量之比为2:1 ,而真核生物为1:1 。核糖体在镁离子和冰醋酸的作用下,RNA和蛋白质分子分离,
进而通过异硫氰酸胍(guanidine isothiocyanate)快速灭活RNA酶。同时在新鲜的β-巯基乙醇(β-Mercapto   ethanol)的参与下,阻止RNA酶分子间二硫键的重新形成。在酸性环境下,酚氯仿的结合,使RNA与残余 蛋白和DNA彻底分离。

产品内容
解离液(Reagent A)                   20 毫升
清理液(Reagent B)                   20 毫升
萃取液(Reagent C)                   20 毫升
沉淀液(Reagent D)                   10 毫升
净化液(Reagent E)                   20 毫升
保存液(Reagent F)                    1 毫升
产品说明书                                    1 份

保存方式
保存萃取液(Reagent C)在-20℃冰箱里,其余的保存在 4℃冰箱里,有效保证 6 月

用户自备
1.5 毫升离心管:用于样品操作的容器
4℃微型台式离心机:用于样品操作
涡旋震荡仪:用于混匀

实验步骤
1 . 准备好 1 至 5 毫克纯化核糖体颗粒
2 .(选择步骤)加入 1 毫升预冷的解离液(Reagent A)
3 .(选择步骤)涡旋震荡 15 秒
4 .(选择步骤)置于冰槽里孵育 30 分钟
5 .(选择步骤)放进 4℃微型台式离心机离心 15 分钟,速度为 16000g
6 .(选择步骤)小心移取上清液到新的 1.5 毫升离心管(注意:可以用于后续蛋白样品分析)
7 . 加入 1 毫升预冷的清理液(Reagent B),混匀颗粒群
8 . 加入 1 毫升萃取液(Reagent C)
9 . 强力涡旋震荡 30 秒
10 .置于冰槽里孵育 15 分钟
11.放进 4℃微型台式离心机离心 15 分钟,速度为 16000g
12 .小心移取 1 毫升上层液相溶液到新的预冷的 1.5 毫升离心管,留下(丢弃)25 微升相位交界面的溶液
13 .加入 500 微升沉淀液(Reagent D),混匀
14 .置于-20℃冰箱里,孵育 15 分钟
15 .放进 4℃微型台式离心机离心 15 分钟,速度为 16000g(或 13000RPM ,例如 eppendorf 5415) 16 .小心抽去上清液
17 .加入 1 毫升净化液(Reagent E)
18 .放进 4℃微型台式离心机离心 5 分钟,速度为 16000g(或 13000RPM ,例如 eppendorf 5415) 19 .小心抽去上清液
20 .空气中晾干
21 .加入 50 微升保存液(Reagent F)
22 .放进-70℃冰箱里储存备用

注意事项
1 .本产品为 20 次操作
2 .整个操作须在 4℃状态下进行
3 .整个操作须带手套
4 .建议使用滤芯枪头,并格外小心,防止降解 RNA
5 .建议所有的操作用品属于 RNA 专用
6 .通常 1 克核糖体样品可以提取 200 至 500 微克 RNA 量
7 .RNA 浓度测定(纳克/微升)=OD260 X 1000 X 4 (1:100 稀释);如果稀释倍数 1:200 ,则系数为 8; 稀 释倍数 1:400 ,则系数为 16
8 .纯化的 RNA 保存在-70℃冰箱里,避免反复冻融
9 .本公司提供系列核糖体制备产品

质量标准
1 .本产品经鉴定性能稳定
2 .本产品经鉴定无核酶成分
3 .本产品经鉴定纯化程度高

使用承诺
上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺” 的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后, 应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定,保证 说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题,请立即以书面形式(实验报告) 与本公司联系,并将该产品退回,经检验确系产品质量所致,本公司负责更换产品。如系使用者错误操作 所致,本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK , RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息
编号                           名称                                              规格
G&VS10413    核糖体(ribosome)RNA 解离试剂盒    20 次
G&VS10413A    解离液(Reagent A)                        100 毫升
G&VS10413B    清理液(Reagent B)                        100 毫升
G&VS10413C    萃取液(Reagent C)                        100 毫升
G&VS10413D    沉淀液(Reagent D)                        500 毫升
G&VS10413E    清理液(Reagent E)                        500 毫升
G&VS10413F    保存液(Reagent F)                        10 毫升

试剂盒订购信息
产品编号                                     名称                                                                  规格
G&VS10409. 1    动物细胞/组织胞质核糖体(ribosome)分离试剂盒                10 次
G&VS10409.2    动物细胞/组织线粒体核糖体(ribosome)分离试剂盒              10 次
G&VS10409.3    动物细胞/组织总核糖体(ribosome)分离试剂盒                     10 次
G&VS10410       动物细胞/组织纯化核糖体(ribosome)蛋白质萃取试剂盒       20 次
G&VS10411       80S 核糖体(ribosome)解离试剂盒                                        10 次
G&VS10412       70S 核糖体(ribosome)解离试剂盒                                        10 次
G&VS10413       核糖体(ribosome)RNA 解离试剂盒                                       10 次


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