关于商城

商城指南

支付方式

配送方式

售后服务

2×探针法 Tth qRT-PCR MasterMix说明书

发布时间：2024/7/16 18:09:43 阅读次数：251

CAT#:JW-990505-1低温运输，-20℃保存

产品及特点
本产品是基于 Tth DNA 聚合酶的荧光探针法 RT-PCR MasterMix ，它含有经
过优化的缓冲液组分、Tth DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2 等所有实时定量 RT-PCR 所需要的成分。与常用的 MMLV-Taq DNA 酶 RT-PCR 体系相比，它们的区别如下：

本产品具有下列特点：
1.方便，用户只需准备模板、引物和探针即可以进行探针法 qRT-PCR 实验。
2.产品为 2×预配液，操作步骤已经最大限度地简化，能减少污染，降低实验误差。
3.60-70℃进行 RT-PCR ，避免了 RNA 二级结构打不开问题和非特异扩增问题。
4.各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。
5.本规格有 1mL ，足够 100 次 20uL 体系的探针法荧光定量 RT-PCR。
6.比进口同类产品性价比更高。
7.本系列产品只可用于科研。

规格及成分
本产品采用塑料袋包装
成分                                                          编号              规格                包装
2×探针法 Tth qRT-PCR MasterMix           990505              1 mL           1.5mL 棕色管
使用手册                                              990505sc               1 份           无

运输及保存：低温运输，-20℃保存，保存期限为 12 个月。
自备试剂：待测 RNA 模板、阳性对照 RNA 模板、引物、探针、超纯水。

使用方法
1.   按下表设置探针法 Tth qRT-PCR 反应，以一个样本为例：
成分                                                               样品管          阴性对照            阳性对照
2×探针法 Tth qRT-PCR MasterMix                10 μL            10 μL                  10 μL
自备引物 1 和引物 2（ 10μM each）          各 1μL          各 1μL           各 1μL
TaqMan 探针（ 5μM）                              1μL              1μL          1μL
自备模板 RNA（ 100ng-1μg）               1-2μL
阳性对照 RNA 模板（ 100ng-1μg）                                    1-2μL
补超纯水到                                                 20μL          20μL           20μL
2.   放入荧光 PCR 仪中进行扩增，下表的扩增参数仅供参考，一般需要根据靶分子长度，引物的 Tm值等进行调节。一般选择三步法 PCR：

步骤                               温度              时间
逆转录（ RT 步骤）       60-70℃    30 min（具体温度根据引物 Tm 决定）
预变性                            95℃    3 min
PCR（ 35-45 次循环）      95℃       15 sec
                                  55-65℃         15-30 sec
                                          72℃       30 sec（根据探针的荧光标记选择对应的荧光通道）
如果引物 Tm值接近 60℃ , 也可以选择两步法 PCR：

步骤                                  温度               时间
逆转录（ RT 步骤）    60-70℃           30 min（具体温度根据引物 Tm 决定）
预变性                                   95℃                  3 min
PCR（ 35-45 次循环）         95℃                    15 sec
                                          60℃                   60 sec（根据探针的荧光标记选择对应的荧光通道）
3.定量分析数据处理：以 6 个 10 倍稀释的标准曲线样本的浓度的 log 值为横轴，以 Ct 值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值，再推算出其浓度。
4.定性分析数据处理：阴性对照 Ct 大于或等于 40（此处为便于叙述姑且以 40 为例，具体设置成多少需要用户根据引物探针的具体情况测试确定）。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct 值应该小于 40 。如果对照结果不能满足上述条件，则实验无效，不需要分析待测样本数据。如果满足上述条件，表示实验有效，则可以继续分析待测样本。对待测样品，如果其 Ct 大于或等于 40 则为阴性，如果小于 40 则为阳性。
关联产品    染料法 Tth qRT-PCR 试剂盒