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填充法双链 DNA 3 末端生物素标记试剂盒说明书

发布时间：2024/7/16 18:22:43 阅读次数：215

CAT#:JW-230750低温运输、-20℃保存

产品及特点
本产品是基于填充法（Fill-in）的双链 DNA 3 端标记试剂盒，其原理是 Klenow DNA 聚合酶以 5 端突出的 DNA 为模板，在修补 DNA 3 端的时候掺入标记了生物素的核苷酸到新合成的 DNA 中，从而得到生物素标记 DNA 探针。其原理示意图如下：

本产品具有下列特点：
1.提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分，简化了反应加样步骤，提高了标记反应的可重复性。
2.使用无外切活性的 Klenow exo- DNA 聚合酶，已标记 DNA 探针不会被酶降解，探针产量更高。
3.快速，最快 25 分钟即可完成标记反应。
4.每次标记反应至少需要 100ng（ 0. 1μg）模板 DNA 。模板 DNA 必须是线状的、 5 端突出的双链 DNA ，不能是平末端或 3 端突出的双链 DNA。
5.掺入标记核苷酸的数量精准，适用于某些特殊的实验。但得到的探针比活不如随机引物法或 PCR 法制备的探针，因为掺入的标记核苷酸少。
6.本产品足够 30 次 20μL 体系的填入法标记实验。
7.本产品只能用于科研。

规格及成分
本产品使用五孔盒包装
成份                                                                     编号             规格                包装
5×Fill-in 标记反应液 (含生物素标记的 dNTP)       220314a   120 μL        0.5mL 绿盖管
Klenow exo- DNA 聚合酶                                   220314b         30 μL         0.5mL 红盖管
超纯水                                                               210806      1 mL           1.5mL 本色管
使用手册                                                               230750sc       1 份          无

运输及保存：低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂：需要自备标记的核苷酸。

使用方法   1.   按下表设置反应：
成分                                                                         用量
线性 DNA（水溶液）                                               0. 1-4 μg
5×Fill-in 标记反应液 (含生物素标记的 dNTP)          4 μL
Klenow exo- DNA 聚合酶                                         1 μL
加超纯水                                                                   至 20 μL
总容积                                                                       20 μL
2.37℃孵育 15 分钟
3.75℃下加热 10 分钟灭活 Klenow exo-DNA 聚合酶。
4.所得的标记 DNA 可以用于各种后续分析。

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