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组织糖胺多糖（GAG）总含量二甲基亚甲基蓝（DMMB）比色法定量检测试剂盒产品说明书

发布时间：2024/9/27 19:05:14 阅读次数：659

主要用途
组织糖胺多糖（GAG）总含量二甲基亚甲基蓝（DMMB）比色法定量检测试剂是一种旨在通过高盐萃取可溶性糖胺多糖，与二甲基亚甲基蓝染料结合，在丙醇解离溶液中，释放紫红色染料，由分光光度仪比色分析，定量检测组织样品中糖胺多糖含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种人体或动物组织（皮肤、肌肉等）、软骨、结缔组织、肿瘤组织等糖胺多糖水平检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测准确。

技术背景
糖胺多糖（glycosaminoglycan；GAG），又称为粘多糖（mucopolysaccharide），是体内最为丰富的异源多聚糖。糖胺多糖是一种未分叉的负电荷性长链多聚糖，由重复的二糖单位，包括六碳糖（hexose）或己糖醛酸（hexuronic acid），链接到己糖胺（hexoamine）上而成。糖胺多糖与核心蛋白（core protein）共价相联，构成蛋白多糖（proteoglycan；PG），成为细胞膜和细胞外基质（extracellular matrix；ECM）的主要成分。蛋白多糖的糖胺多糖在合成过程中发生硫酸酯化（sulfated group），其部位在O或N位上，有利于发挥各种不同的作用，包括酶的调节、细胞黏附、生长、迁移、分化，以及组织损伤反应。基于糖胺多糖的高度负电荷的特点，使用异染性（metachromatic）阳离子蓝色染料二甲基亚甲基蓝（1,9-dimethylmethylene blue； DMMB），在酸性条件下，特异性的结合产生不溶性紫色或粉红色糖胺多糖染料复合物（Dye-GAG complex），在丙醇解离溶液中，释放出染料，通过分光光度仪（656nm波长）测定，来定量分析糖胺多糖的总含量。

产品内容
清理液（Reagent A）        毫升
萃取液（Reagent B）        毫升
染色液（Reagent C）        毫升
解离液（Reagent D）    毫升
标准液（Reagent E）        微升
产品说明书        1 份
保存方式

保存萃取液（Reagent B）在－20℃冰箱里；其余的保存在 4℃冰箱里；染色液（Reagent C）避免光照；有效保证 6 月

用户自备
1.5 毫升离心管：用于样品操作的容器
15 毫升锥形离心管：用于样品操作的容器恒温水槽或干式恒温仪：用于样品反应

微型台式离心机：用于样品操作
比色皿或酶标板：用于比色分析的容器
分光光度仪或酶标仪：用于比色分析

实验步骤
一、样品预处理
1 ．手术取出动物组织，并秤重以确定 200 毫克组织重量
2 ．（选择步骤）放进预冷的 15 毫升锥形离心管
3 ．（选择步骤）加入 xx 毫升清理液（Reagent A）清洗 1 次
4 ．移入到一个液氮冻存管
5 ．即刻放进液氮罐过夜
6 ．次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状（注意：切莫使组织冻融）
7 ．放进一个 1.5 毫升离心管
8 ．加入 xx 微升萃取液（Reagent B）
9 ．强力涡旋震荡 1 分钟，充分混匀
10 ．放进 56℃恒温水槽孵育 16 小时
11．放进 90℃恒温水槽孵育 10 分钟
12 ．放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM ，例如 eppendorf 5415）
13 ．小心移取上清液到新的 1.5 毫升离心管
14 ．置于冰槽里备用

二、标准样品配制
1 ．准备好 5 个 1.5 毫升离心管，标记为 1 至 5 号管
2 ．分别加入 xx 微升清理液（Reagent A）到 1 至 5 号管
3 ．移取 xx 微升标准液（Reagent E）到 1 号管，混匀
4 ．小心移取 xx 微升 1 号管稀释的标准液（Reagent E）到 2 号管，混匀
5 ．小心移取 xx 微升 2 号管稀释的标准液（Reagent E）到 3 号管，混匀
6 ．小心移取 xx 微升 3 号管稀释的标准液（Reagent E）到 4 号管，混匀
7 ．将 1 至 5 号管放进冰槽里备用；标准管浓度见下表

管号    清理液（Reagent A）        标准液（Reagent E）        标准糖胺多糖含量
1    xx 微升            xx 微升            xx 微克
2    xx 微升            xx 微升 1 号管        xx 微克
3    xx 微升            xx 微升 2 号管        xx 微克
4    xx 微升            xx 微升 3 号管        xx 微克
5    xx 微升            0            0

三、标准曲线测定
1 ．移取 xx 微升上述配制的标准液（Reagent E）到 1.5 毫升离心管
2 ．加入 xx 毫升染色液（Reagent C）
3 ．涡旋震荡 15 秒
4 ．室温下孵育30 分钟，避免光照，期间每隔 5 分钟涡旋震荡 15 秒（注意：可见紫色或粉红色沉淀）
5 ．即刻放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 16000g
6 ．小心抽去上清液（注意：确保没有水滴残留）
7 ．加入 xx 毫升解离液（Reagent D）
8 ．涡旋震荡 15 秒
9 ．室温下孵育 5 分钟，避免光照（注意：确保充分溶解）
10 ．转移到新的比色皿
11．即刻放进分光光度仪检测（波长 656nm）：获得标准样品吸光读数
12 ．重复实验步骤 1 至 11 四次
13 ．构建标准曲线：纵座标（Y 轴）为吸光读数；横座标（X 轴）为标准糖胺多糖含量（微克）

四、样品测定
1 ．加入 50 微升上述制备的待测样品到 1.5 毫升离心管
2 ．加入 xx 毫升染色液（Reagent C）
3 ．涡旋震荡 15 秒
4 ．室温下孵育30 分钟，避免光照，期间每隔 5 分钟涡旋震荡 15 秒（注意：可见紫色或粉红色沉淀）
5 ．即刻放进微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 16000g
6 ．小心抽去上清液（注意：确保没有水滴残留）
7 ．加入 xx 毫升解离液（Reagent D）
8 ．涡旋震荡 15 秒
9 ．室温下孵育 5 分钟，避免光照（注意：确保充分溶解）
10 ．转移到新的比色皿
11．即刻放进分光光度仪检测（波长 656nm）：获得样品吸光读数
12 ．根据上述标准曲线获得样品对应糖胺多糖含量（微克）

五、浓度计算
根据上述标准曲线样品对应糖胺多糖含量（微克）÷0.050（样品容量；毫升）＝微克糖胺多糖/毫升

注意事项

1 ．本产品为 25 次操作，包括标准样品
2 ．本产品不适合于非硫酸酯化的二糖降解片段、透明质酸（hyaluronate）的检测
3 ．本产品可以检测硫酸软骨素（chondroitin sulfate）、硫酸角质素（keratan sulfate）、硫酸皮肤素（dermatan sulfate）、硫酸类肝素（heparan sulfate）等主要糖胺多糖
4 ．本产品检测范围为 0.2 至 5 微克糖胺多糖
5 ．操作时，须戴手套
6 ．系统操作时，标准样品测定只需 1 次
7 ．空白对照读数通常小于 0.06 ，如果超过表明抽去上清操作不当
8 ．孵育时，避免光照
9 ．如果样品糖胺多糖含量过低，可以浓缩样品或增加样品量至 100 微升
10 ．样品浓度可以表述为：微克糖胺多糖/组织重量；微克糖胺多糖/组织总蛋白等
11．本公司提供系列糖类代谢检测试剂产品

质量标准
1 ．本产品经鉴定性能稳定
2 ．本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒
IF IT DOESN’T WORK ， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息
单组分订购信息
编号                            名称                                                                                 规格
G&VS19239.2          组织糖胺多糖总含量二甲基亚甲基蓝比色法定量检测试剂盒         20 次
G&VS19239.2A        清理液（Reagent A）                                                             毫升
G&VS19239.2B        萃取液（Reagent B）                                                             毫升
G&VS19239.2C        染色液（Reagent C）                                                             毫升
G&VS19239.2D        解离液（Reagent D）                                                             毫升
G&VS19239.2E         标准液（Reagent E）                                                             毫升

试剂盒订购信息
产品编号    名称    规格
G&VS 19239. 1    细胞糖胺多糖（GAG）总含量二甲基亚甲基蓝（DMMB）比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS 19239.2    组织糖胺多糖（GAG）总含量二甲基亚甲基蓝（DMMB）比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS 19239.3    血液糖胺多糖（GAG）总含量二甲基亚甲基蓝（DMMB）比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS 19239.4    体液糖胺多糖（GAG）总含量二甲基亚甲基蓝（DMMB）比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS 19240. 1    细胞 O 链接硫酸酯化糖胺多糖（O-sGAG）含量二甲基亚甲基蓝（DMMB）比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS 19240.2    组织 O 链接硫酸酯化糖胺多糖（O-sGAG）含量二甲基亚甲基蓝（DMMB）比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS 19240.3    血液 O 链接硫酸酯化糖胺多糖（O-sGAG）含量二甲基亚甲基蓝（DMMB）比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS 19240.4    体液 O 链接硫酸酯化糖胺多糖（O-sGAG）含量二甲基亚甲基蓝（DMMB）比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS 19241. 1    细胞 N-链接硫酸酯化糖胺多糖（N-sGAG）含量二甲基亚甲基蓝（DMMB）比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS 19241.2    组织 N-链接硫酸酯化糖胺多糖（N-sGAG）含量二甲基亚甲基蓝（DMMB）比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS 19241.3    血液 N-链接硫酸酯化糖胺多糖（N-sGAG）含量二甲基亚甲基蓝（DMMB）比色法定量检测试剂盒    20 次
G&VS 19241.4    体液 N-链接硫酸酯化糖胺多糖（N-sGAG）含量二甲基亚甲基蓝（DMMB）比色法定量检测试剂盒    20 次