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大肠杆菌TOP10菌种说明书

发布时间：2024/10/28 9:22:47 阅读次数：63

CAT#:JW-2-0081

低温运输，-80℃保存

产品及特点

本产品为大肠杆菌TOP10甘油菌菌种，该菌种是大肠杆菌K-12系衍生菌株，主要用于克隆和质粒制备。它具有如下特点：

核酸内切酶缺陷，能够有效提升制备的质粒DNA的质量。

三条重组途径均失去活性，能够有效提高DNA插入片段的稳定性。

EcoK甲基化修饰和限制系统缺失，故可用EcoK位点甲基化和非甲基化的DNA（如PCR产物）进行转化并制备非甲基化的DNA。

McrA、McrBC和Mrr三套依赖于甲基化的限制系统缺失，可用甲基化的DNA（如基因组DNA）进行转化制备非甲基化的DNA。

如果质粒携带b-半乳糖苷酶a片段，则可用蓝白筛选法筛选重组子。

具有链霉素抗性和2-脱氧半乳糖抗性。

本产品只可用于科研。

基因型

大肠杆菌TOP10菌种的基因型是：K-12, F-,araD139, Δ(ara-leu)7697, deoR,endA1,F80lacZDM15,galU,galK,ΔlacX74,mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC), nupG,recA1,rpsL

大肠杆菌TOP10菌种基因型符号及其含义列表如下：

基因型符号	含义
K-12	K-12系的所有菌种默认都携带F因子和l、e14、rac三种原噬菌体。其中的e14携带野生型mcrA基因，其产物可对甲基化的CG切割。
F-	本菌种缺失F因子
araD139	不能代谢阿拉伯糖
△(ara-leu)7697	不能自身合成亮氨酸
deoR,	deo操纵子阻遏蛋白失活，脱氧核糖组成型合成
endA1	核酸内切酶I缺失
F80lacZDM15	F80原噬菌体上携带lacZDM15，其编码b-半乳糖苷酶基因w片段，与携带a片段的质粒互补可恢复酶活性，用于蓝白斑筛选
galU	葡萄糖-1-磷酸尿苷酰转移酶失活，不能合成半乳糖，对2-脱氧半乳糖抗性
galK	半乳糖激酶失活，不能利用半乳糖，对2脱氧半乳糖抗性
△lacX74	lac操纵子和邻近区域缺失，不能代谢乳糖
mcrA	在此菌种中，e14原噬菌体携带的mcrA基因缺失，故不能对甲基化的CG切割
△(mrr–hsdRMS-mcrBC)	缺失对甲基化C的限制、缺失EcoK修饰限制系统，缺失对甲基化A的限制
nupG	同deoR，核苷酸转运突变，使得细胞组成型合成核苷酸，用于质粒制备
recA1	ATP依赖型重组酶失活，recBCD、recE和recF三条重组路径均复丧失，重组率降低1万倍。适合扩增有回文结构的高拷贝质粒
rpsL	30S核糖体S12突变，导致对链霉素抗性

规格及成分

本产品使用塑料袋包装

成分	编号	规格	包装
大肠杆菌TOP10菌种	2-0081	1.0 mL	2.0 mL菌种管
使用手册	2-0081sc	1份	无

运输及保存

低温运输，-80℃保种保存，有效期一年。

自备物品

无

使用方法

按常规操作在固体培养皿上划线涂板，得到单克隆后再进行后续的感受态细胞制备和转化表达等操作，具体步骤请见分子克隆手册等工具书。

关联产品

E.coli大肠杆菌BL21(DE3)菌种

CAT#: JW-2-0047

低温运输，-80℃保存

产品及特点

大肠杆菌HB101是由美国科学家H. Boyer用E.coli K112系与E.coli B系菌种杂交后分离而得的菌株，其基因组的绝大部分来源于K112菌种。它能被质粒有效的转化，故常用于质粒的大量制备。它具有下列特点：

三个DNA重组途径均缺失，故DNA重组效率极低，尤其适合制备有回文结构的高拷贝质粒。

携带琥珀抑制基因，故允许有琥珀突变的质粒和噬菌体生长。

Eco甲基化修饰和限制系统缺失，可用甲基化和非甲基化的质粒DNA转化本菌种，扩增得到的质粒DNA均为非甲基化DNA。

本菌种具有链霉素和2-脱氧半乳糖抗性。

基因型

大肠杆菌HB101菌种的基因型是：B系,F-,l-,araC14, leuB6(Am), Δ(gpt-proA)62,lacY1, glnX44(AS), galK2(Oc), recA13, rpsL20(strR), xylA5, mtl-1, thiE1,[hsdS20]（各文献上报道的基因型稍微有所不同，此处采用美国耶鲁大学Coli Genetic Stock Center的资料）。

大肠杆菌HB101菌种基因型符号及其含义列表如下：

基因型符号	含义
K-12	K-12系的所有菌种默认都携带F因子和l、e14、rac三种原噬菌体。其中的e14携带野生型mcrA基因，其产物可对甲基化的CG切割。
F-	此菌种缺失F因子
l-	此菌种缺失l原噬菌体
araC14	原ara-14，阿拉伯糖异构酶失活，不能利用阿拉伯糖
galK2(Oc)	原gal2，半乳糖激酶基因134位密码子GAA(glu) 突变为TAA(ochre)，半乳糖激酶失活，不能利用半乳糖，对2脱氧半乳糖抗性
glnX44(AS)	原glnV44、supE44和su+II，tRNA反密码子第三位的C to T，使琥珀终止子UAG编码谷氨酰胺，是琥珀抑制突变（ambersuppressor，AS），为某些质粒和噬菌体生长所需
[hsdS20]	此突变来于 E. coli B系亲本，其EcoB系统Eco位点识别能力缺失，甲基化修饰和限制功能均失，表型为rB-mB-
lacY1	半乳糖苷通透酶突变，不能转入半乳糖，使IPTG诱导增效
leuB6(Am)	b-异丙基苹果酸脱氢酶基于发生琥珀突变（UAG），酶失活，不能合成亮氨酸
mtl-1	不能利用甘露糖醇
Δ(gpt-proA)62	原proA2，g-谷氨酸磷酸还原酶失活，不能合成脯氨酸
recA13	ATP依赖型重组酶失活，recBCD、recE和recF三条重组路径均复丧失，重组率降低1万倍。适合扩增有回文结构的高拷贝质粒
rpsL20	30S核糖体S12突变，导致对链霉素抗性
thiE1	原thi-1，不能合成硫氨（维生素B1）
xyl-5	不能利用木糖

原始文献

Boyer H.W. and Roulland-Dussoix D.1969. A complementation analysis of the restriction and modification of DNA in Escherichia coli. J. Mol. Biol. 41：459-472.

规格及成分

本产品使用塑料袋包装