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大肠杆菌DH5α菌种说明书

发布时间：2024/10/28 9:24:18 阅读次数：71

CAT#:JW-2-0011

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产品及特点

本菌种是美国科学家D. Hanahan在1983年首次报道的K-12系大肠杆菌菌株，它是以DH1为基础构建的，是分子生物学中最常用的用于克隆的大肠杆菌菌株，其主要特点如下：

转化效率比DH1更高，适用于分子克隆。

脱氧核糖组成型合成，适合扩增制备高拷贝和大型质粒。

携带b-半乳糖苷酶w片段，如果外源基因携带此酶的a片段，则可以进行蓝白斑筛选重组子。

内源核酸酶EndA1缺失，提取的质粒DNA残留DNase少，质量高。

基于RecA的三套重组系统均缺失，质粒在复制过程发生重组、丢失和串环的可能性降到最低，使得插入片段稳定。

EcoK限制功能缺失（hsdR-），不能酶切在EcoK位点没有甲基化的DNA，但其修饰功能完整，故可以用EcoK位点非甲基化质粒通过本菌株制备其对应的甲基化质粒，后者可用来转化限制EcoK功能正常（基因型为hsdR+）的K-12系的大肠杆菌。

本菌株对常见抗菌素没有抗性。

基因型

大肠杆菌DH5a菌种的基因型是：K-12,F-,φ80,l-,Δ(argF-lac)169， DlacZ58(M15), ΔphoA8，glnX44(AS), deoR481, rfbC1, gyrA96(NalR), recA1, endA1, thiE1, hsdR17（各文献上报道的基因型稍微有所不同，此处采用美国耶鲁大学Coli Genetic Stock Center的资料）。

大肠杆菌DH5a菌种基因型符号及其含义列表如下：

基因型符号	含义
K-12	K-12系的所有菌种默认都携带F因子和l、e14、rac三种原噬菌体。其中的e14携带野生型mcrA基因，其产物可对甲基化的CG切割。
F-	此菌株缺失F因子
l-	此菌株缺失l原噬菌体
φ80	携带φ80原噬菌体
DΔ(argF-lacZ)U169	也叫ΔlacU169，来于Hfr3000U169菌种，位于此区域的lac操纵子和过氧化氢敏感基因缺失，使细菌抗过氧化氢，实际缺失mmuP到argF和lac到mhpD的区域，实为Δ(mmuP-mphD)
rfbC1	LPS合成缺失，缺失LPS有助于提高转化效率
deoR481	deo操纵子阻遏蛋白失活，脱氧核糖组成型合成，适合扩增制备质粒
endA1	核酸内切酶I缺失
glnX44（Am）	同supE和glnV，使琥珀终止子编码谷氨酰胺，为部分噬菌体生长所需
gyrA96	DNA促旋酶失活，导致对萘啶酮酸和荧光喹啉的抗性
hsdR17	EcoK系统的限制性内切酶Eco失活，不酶切非甲基化的Eco位点
ΔlacZ58M15	原ΔlacZM15，携带来于M15菌株的、编码b-半乳糖苷酶的w片段，与编码b-半乳糖苷酶a片段的质粒互补可，恢复酶活性，用于蓝白斑筛选
recA1	ATP依赖型重组酶失活，recBCD、recE和recF三条重组路径均复丧失，重组率降低1万倍。适合扩增有回文结构的高拷贝质粒
thiE1	原thi-1，不能合成硫氨（维生素B1）