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大肠杆菌BL21（DE3） plysS菌种E.coli 说明书

发布时间：2024/10/28 9:35:21 阅读次数：90

CAT#:JW-12-0042

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产品及特点

本菌株是在大肠杆菌B系的、广泛用于外源蛋白表达的BL21（DE3）菌株中转入一个pLysS质粒而得，主要用于表达对宿主有毒性的、一般情况下很难表达的基因。它具有下列特点：

1. 染色体上携带由lacUV5启动子控制的T7 RNA 聚合酶基因，故在IPTG诱导下，可以高效表达T7启动子驱动的外源基因。

2. 携带pLysS质粒，该质粒使菌株为氯霉素(34ug/mL)抗性，其lysS基因编码的T7溶菌酶可以阻止T7 RNA聚合酶和其启动子的结合，阻断背景表达，故本菌株主要用于毒性蛋白的表达。

3. 由于pLysS的复制起始位点为p15A型，跟复制起始位点为ColE1和pMB1型的质粒兼容，故外源基因可以克隆到pUC系列或pBR322系列的质粒中，同时转入到宿主菌中。

4. 缺失lon和ompT两个蛋白酶基因，有利于外源蛋白的纯化。

5. EcoB系统Eco位点识别能力缺失，导致EcoB甲基化修饰和限制功能均失，甲基化和非甲基化质粒DNA均可转入本菌种。

6. 本菌株具有氯霉素抗性。

基因型

大肠杆菌BL21(DE3)pLysS菌种的基因型是：B系，F-, pLysS, lon-11, Δ(ompT-nfrA)885, Δ(galM-ybhJ)884, lDE3 [lacI lacUV5-T7 gene 1 ind1 sam7 nin5], Δ46, [mal+]K-12(lS), hsdS10(各文献上报道的基因型稍微有所不同，此处采用美国耶鲁大学Coli Genetic Stock Center的资料)。

大肠杆菌BL21(DE3) pLysS基因型符号及其含义列表如下：

基因型符号	含义
B系	B系大肠杆菌默认基因型是lon-dcm-，lon突变是lon启动子有一个IS186插入突变，使ATP依赖性蛋白酶Lon缺失，提高重组蛋白产量；dcm突变使胞嘧啶甲基化酶失活，CCWGG中的第二个C不再被甲基化，可通过影响甲基化依赖的突变修复系统而提高突变率
F-	不携带F质粒
lon-11	描述见上
pLysS	携带pLysS质粒，由T7基因3.5(即溶菌酶基因)克隆进pACYC184的BamHI位点而得，其复制起始位点为p15A型，为氯霉素抗性
l(DE3[lacI lacUV5-T7 gene1 ind1 sam7 nin5])	染色体携带DE3 l原噬菌体，此片段后者又携带lacI、sam7I等基因和由lacUV5启动子控制的T7 RNA聚合酶基因
Δ(galM-ybhJ)884	缺失galMKTE、modFE、acrZ、modABC、ybhA、pgl、ybhD、ybhH、ybhI和ybhJ基因
hsdS10	EcoB系统Eco位点识别能力缺失，导致甲基化修饰和限制功能均失
[mal+] K-12(lS)	malK、lamB、malM来于E. coli K-12，为野生型，通过转导获得。野生型的lamB使得菌株对l噬菌体感染敏感
Δ(ompT-nfrA)885	缺失从DLP12原噬菌体到Rhs因子这段区域，包括appY 、ompT、envY、ybcH和nfrA五个基因。其中ompT编码外膜蛋白酶VII，其缺失降低了蛋白降解，有利于表达蛋白纯化