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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

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全组织β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒产品说明书

发布时间：2024/11/13 15:17:26 阅读次数：176

主要用途

全组织β-半乳糖苷酶原位染色试剂是一种旨在以X-Gal为底物，通过组织内表达的外源性细菌β-半乳糖苷酶的催化所生成的深蓝色的沉积产物，从而在光学显微镜下观察到蓝色表达的组织细胞分布，藉此建立一种简单的目测颜色来识别报告基因阳性组织细胞的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。广泛应用于基因组学、蛋白质组学和其它分子生物学研究。其适用于转基因后的人体和动物组织。产品即到即用，性能稳定，参数优化，着色敏感，堪称国际上同类产品最佳。

技术背景

大肠杆菌的标志基因Lac Z编码β-半乳糖苷酶（ß-galactosidase；ß-gal），在其催化作用下，半乳糖可从乳糖的水解作用中得到。β-半乳糖苷酶非常稳定，对蛋白水解降解作用抗性强，且容易测试。因此β-半乳糖苷酶成为目前最常用的报告基因，以评价载体转染的效果。X-Gal （5-bromo-4-chloro-3-indoyl-ß-D-Galacto pyranoside）是生物化学中常用的一种有机物，β-半乳糖苷酶可以将X-Gal转化为蓝色的产物，由此用它作为生色底物，来建立一种简单的目测颜色来确定原始组织β-半乳糖苷酶的活性，从而通过光学显微镜鉴别转染后组织细胞报告基因的存在与否和强弱表现。全组织（WHOLE MOUNT或EN BLOC）原位染色第一时间真实反应转染效果，组织形态维持良好，同时后续使用石蜡切片存档保存成为可能。

产品内容

清理液（Reagent A）毫升

固定液（Reagent B）毫升

净化液（Reagent C）毫升

稀释液（Reagent D）毫升

染色液（Reagent E）毫升

产品说明书 1份

保存方式

保存染色液（Reagent E）在－20℃冰箱里；其余的保存在4℃冰箱里；稀释液（Reagent D）和染色液（Reagent E），用铝箔封裹，避免光照；有效保证6月

用户自备

15毫升锥形离心管：用于配制染色工作液

恒温培养箱：用于染色孵育

切片仪：用于石蜡或冰冻切片

光学显微镜：观察染色后的组织细胞

实验步骤

实验开始前，将试剂盒里的染色液（Reagent E）从－20℃的冰箱里取出，置入冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀释液（Reagent D）到15毫升离心管，加入xx微升染色液（Reagent E），混匀后，置入暗室里，室温下，标记为染色工作液。然后进行下列操作：

1．准备1个6孔细胞培养板

2．放进新鲜切除的动物组织样本（注意：建议组织大小为0.5厘米厚，1厘米长；如果过大，最好刀切处理一下）

3．将组织压平

4．小心加入xx毫升清理液（Reagent A），清洗组织样本

5．小心抽去清理液

6．小心加入xx毫升固定液（Reagent B），浸没整个组织

7．在4℃条件下孵育2小时

8．小心抽去固定液

9．小心加入xx毫升净化液（Reagent C），清洗组织样本

10．在室温下孵育15分钟

11．小心抽去净化液

12．重复实验步骤9至11一次

13．小心加入xx毫升染色工作液，浸没整个组织

14．放进37℃培养箱，孵育16小时，避免光照

15．后续石蜡切片（6微米厚）或冰冻切片（10微米厚）

16．在光学显微镜下观察和计数：表达β- 半乳糖苷酶活性的组织细胞为阳性细胞，呈现蓝色

注意事项

1．本产品为10次（10个样本）操作

2．操作时须戴手套

3．建议使用核内表达的载体代替胞内表达的载体转染或感染组织为佳

4．原始组织大小可以1厘米厚、2厘米长进行染色，但建议越小越佳

5．本产品的参数：固着剂种类和浓度、pH、生色底物的选择和浓度等达到最优化

6． 染色工作液避免光照

7．用户根据实际需求，按比例配制试剂用量

8．染色时，培养箱为一般培养箱，没有二氧化碳，以防影响pH

9．染色孵育过程，避免光照

10．细胞β-半乳糖苷酶活性强，孵育3小时即显示阳性；细胞β-半乳糖苷酶活性弱，则需要孵育16小时

11．全组织染色存在其染色不均匀、组织内部染色渗透困难等局限

12．染色后的后续处理的切片样品可以长期保存，同样须避免光照

13．细胞质呈现蓝色为酶活性表达或报告基因阳性

14．本公司提供系列β-半乳糖苷酶检测试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定着色清晰

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组分订购信息

编号名称规格

G&VS10010.2 全组织β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒 10次

G&VS10010.2A 清理液（Reagent A）毫升

G&VS10010.2B 固定液（Reagent B）毫升

G&VS10010.2C 净化液（Reagent C）毫升

G&VS10010.2D 稀释液（Reagent D）毫升

G&VS10010.2E 染色液（Reagent E）毫升

试剂盒订购信息

产品编号	名称	规格
G&VS10010.1	细胞β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒	100/250次
G&VS10010.2	全组织β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒	10次
G&VS10010.3	冰冻切片β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒	50次
G&VS10010.4	通用型组织/细胞β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒	10/100次
G&VS10012.1	细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒	100/250次
G&VS10012.2	全组织衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒	10次
G&VS10012.3	冰冻切片衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒	50次
G&VS10012.4	通用型组织/细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒	10/100次
G&VS60003.1	细菌β－半乳糖苷酶活性原位染色试剂盒	40次
G&VS60003.2	细菌β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒	20次
G&VS60003.3	细菌β-半乳糖苷酶活性比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS60003.4	细菌β-半乳糖苷酶活性高质敏感比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS10037.1	动物细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒	20次
G&VS10037.2	动物细胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS10037.3	动物组织β-半乳糖苷酶活性比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS60013.1	真菌/酵母细胞β-半乳糖苷酶活性化学发光法定量检测试剂盒	20次
G&VS60013.2	真菌/酵母细胞β-半乳糖苷酶活性比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS60013.3	真菌/酵母细胞β-半乳糖苷酶活性高质敏感比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS60013.4	真菌/酵母细胞β-半乳糖苷酶活性滤膜染色试剂盒	20次
G&VS10060.1	动物细胞β-半乳糖苷酶活性高质敏感比色法定量检测试剂盒	20次
G&VS10060.2	动物组织β-半乳糖苷酶活性高质敏感比色法定量检测试剂盒	20次