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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

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真菌/酵母细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒产品说明书

发布时间：2024/11/25 18:16:36 阅读次数：1491

真菌/酵母细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒产品说明书

主要用途

真菌/酵母细胞色素C氧化酶活性测定试剂是一种旨在通过细胞色素C氧化酶反应系统中还原性细胞色素C氧化后吸光峰值的降低，即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种真菌或酵母细胞株裂解悬液中细胞色素C氧化酶的活性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定。

技术背景

细胞色素C氧化酶（Cytochrome c oxidase）存在于真核生物的细胞线粒体上（包括真菌和酵母细胞），主要通过氧化磷酸化为细胞提供能量。基于底物还原型细胞色素C（reduced cytochrome c），受到细胞色素C氧化酶的催化，转化为氧化型细胞色素C（oxidized cytochrome c），在分光光度仪下，出现吸光值的变化（550nm 波长），由此定量测定细胞色素C氧化酶的活性。细胞色素C氧化酶反应系统为：

产品内容

裂解液（Reagent A）毫升

强化液（Reagent B）毫升

活性液（Reagent C）微升

缓冲液（Reagent D）毫升

反应液（Reagent E）毫升

稳定液A（Reagent F1）管

稳定液B（Reagent F2）微升

产品说明书1份

保存方式

强化液（Reagent B）和缓冲液（Reagent D）保存在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；反应液（Reagent E）避免光照；有效保证6月

用户自备

15毫升锥形离心管：用于真菌/酵母细胞收集的容器

1.5毫升离心管：用于真菌/酵母细胞裂解操作或反应液配制的容器

台式离心机：用于沉淀真菌/酵母细胞

微型台式离心机：用于真菌/酵母细胞裂解悬液澄清

比色皿：用于比色检测的容器

分光光度仪：用于比色分析

实验步骤

一、 样品准备

1．准备好10毫升待测的新鲜真菌/酵母细胞（OD600＝0.4至0.8，即1至2 X 10⁷细胞/毫升）

2．移入到预冷的15毫升锥形离心管

3．置于冰槽里5分钟

4．放进4℃台式离心机离心5分钟，速度为1000g

5．小心抽去上清液

6．加入xx微升裂解液（Reagent A），充分混匀

7．转移到预冷的1.5毫升离心管

8．加入xx微升强化液（Reagent B）（注意：参见注意事项3）

9．加入xx12.5微升活性液（Reagent C）

10．强力涡旋震荡15秒

11．置于冰槽里1分钟

12．重复实验步骤10至11五次

13．加入xx微升裂解液（Reagent A），充分混匀

14．放进4℃微型台式离心机离心15分钟，速度为16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415）

15．小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管

16．移取5微升进行蛋白定量测定（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－G&VS30030.1）

17．即刻放进－70℃保存或置于冰槽里继续后续操作

二、 测读准备

1．准备好上述制备好的样品，置于冰槽里融化

2．设定好分光光度仪：温度28℃，波长550nm，间隔10秒，测读7次（共60秒），并置零或设置0秒和60秒各测读1次

3．实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的稳定液B（Reagent F2）置入冰槽里融化，然后移出xx微升到稳定液A（Reagent F1）管里，混匀后，标记为稳定工作液，置于冰槽里备用（注意，用完后即刻放回－20℃冰箱里）。然后将－20℃冰箱里的试剂盒中的反应液（Reagent E）置入冰槽里融化，然后移出100微升到新的1.5毫升离心管，加入xx微升稳定工作液，轻柔混匀后，室温下暗室里静置至少15分钟（可见颜色变化），置于冰槽里，标记为反应工作液（注意：参见注意事项6），放在暗室里

4． 缓冲液（Reagent D）室温下均衡温度

三、 背景对照测定

1．移取xx微升缓冲液（Reagent D）到新的1毫升比色皿

2．加入xx微升裂解液（Reagent B）

3．上下倾倒数次，混匀

4．室温下孵育2分钟

5．放进分光光度仪，置零

6．取出比色皿，加入xx微升含有反应液（Reagent E）和稳定液（Reagent F）的反应工作液

7．上下倾倒数次，混匀

8．即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照（0秒读数－60秒读数），正常读数差值为0.001至0.005

四、 样品测定

1．移取xx微升缓冲液（Reagent D）到新的比色皿

2．加入100微升待测样品（注意：建议总量50微克总蛋白，且样品需澄清）

3．上下倾倒数次，混匀

4．室温下孵育2分钟

5．放进分光光度仪，置零

6．取出比色皿，加入xx微升含有反应液（Reagent E）和稳定液（Reagent F）的反应工作液

7．即刻上下倾倒数次，混匀（限定在3秒之内）

8．即刻放进分光光度仪检测，此为样品读数（0秒读数－60秒读数），通常活性读数差值为正数

四、 计算样品活性

注意事项

1．本产品为20次操作，包括背景对照

2．操作时，须戴手套

3．样品中忌用DTT和巯基乙醇等处理

4． 强化液（Reagent B）为固体状，移取方法为：使用1毫升枪头，将尖端部分剪去；或使用0.5毫升PCR管的盖子内圈盛满；或秤重0.1克

5．建议测定细胞裂解悬液的蛋白浓度，便于计算活性单位之需；建议使用 Bradford蛋白质浓度定量检测试剂盒（G&VS30030.1）

6．每增加1个样品，增加反应工作液为：反应液（Reagent E）50微升＋稳定工作液1.5微升，以此类推。配制反应工作液时，须根据样本数量配制实际工作液容量

7．系统操作过程中，背景测定只需1次

8．分光光度计波长严格设置在550nm，误差10nm将不产生信号

9．加样后3秒内进行比色测定

10．比色测定后，比色皿须清洗彻底

11．背景空对照0秒读数通常0.2至0.8为理想状态

12．背景空对照的正常读数差值（0秒－60秒）通常为0.001至0.005（正负即可）

13．样品0秒读数通常和背景空对照0秒读数一致

14．样本测定60秒读数低于0秒读数表明具有酶活性

15．酶活性单位浓度定义：在28℃室温下，pH 7.0的情况下，每单位酶在单位时间内（每分钟）氧化1微摩尔的细胞色素C

16．建议待测样本总蛋白浓度为50微克/100微升；如果样本酶活性过低或过高，即60秒读数不变或为零，则可以增加或降低样本量（本公司提供 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒G&VS30030.1）

17．本公司提供系列细胞色素相关试剂产品

质量标准

1．本产品经鉴定性能稳定

2．本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

上海极威生物科技有限公司秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。

订购信息

单组分订购信息

编号名称规格

G&VS10014.5 真菌/酵母细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒 20次

G&VS10014.5A 裂解液（Reagent A）毫升

G&VS10014.5B 强化液（Reagent B）毫升

G&VS10014.5C 活性液（Reagent C）毫升

G&VS10014.5D 缓冲液（Reagent D）毫升

G&VS10014.5E 反应液（Reagent E）毫升

G&VS10014.5F 稳定液A（Reagent F1）管

G&VS10014.5G 稳定液B（Reagent F2）毫升

G&VS30030.1 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒 100次

试剂盒订购信息

产品编号	名称	规格
G&VS10014.1	线粒体外膜功能检测试剂盒	20次
G&VS10014.2	纯化线粒体细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒	20次
G&VS10014.3.1	细胞细胞细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒	20次
G&VS10014.3.2	组织样品细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒	20次
G&VS10014.4	纯化细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒	20次
G&VS10014.5	真菌/酵母细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒	20次
G&VS10014.6	植物细胞色素C氧化酶活性测定试剂盒	20次