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发布时间：2025/3/25 10:18:21 阅读次数：34
糜蛋白酶活性检测试剂盒说明书
Chymotrypsin Assay Kit
分光光度法
货号：JW-AK131
规格：100T/96S
产品组成及保存条件：
| 编号 | 规格 | 储存条件 |
| JW-AK131-A | 50ml×1 瓶 | 4℃保存； |
| JW-AK131-B | 粉剂× 1 瓶 | 4℃避光保存.临用前加入 50 mL 蒸馏水充分溶解. |
※ 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定.
简介：
意义：糜蛋白酶 (Chymotrypsin) 又称胰凝乳蛋白酶,是胰腺分泌的一种蛋白水解酶,能迅速分解变性 蛋白质.糜蛋白酶的功能与胰蛋白酶相似,但是具有分解能力强 毒性低和不良反应小等优点.临床上糜 蛋白酶用于痰液稀化,对脓性和非脓性痰液均有效；也用于创伤或手术后伤口愈合,如白 内障摘除.
原理：糜蛋白酶催化 ATEE 水解,产物在 237 nm 有特征光吸收；通过测定 237 nm 光吸收增加速 率,来计算糜蛋白酶活性.
自备用品：
紫外分光光度计/酶标仪 微量石英比色皿/96 孔板 水浴锅 天平 烘箱 玻璃管 离心机 可调式移 液枪 蒸馏水.
粗酶液提取：
1. 组织样品：按照组织质量（g）：AK131-A 体积(mL)为 1 ：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织, 加入 1mL AK131-A）冰浴匀浆,8000g ,4℃离心 10min,取上清,即粗酶液.
2. 血清等液体：直接测定.
测定步骤：
1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到237 nm,蒸馏水调零.
2. AK131-B 置于37℃水浴中保温30min.
3. 取取1mL 石英比色皿加入下列试剂：
| 试剂名称 | 空白管 (ul) | 测定管 (ul) |
| AK131-A | 100 |
|
| AK131-B | 1000 |
|
| 混匀于237nm 测定4min 内吸光值变化,记为△A 空白管.（从吸光值稳定增加开始计时） | ||
| 粗酶液 |
| 100 |
| AK131-B |
| 1000 |
| 混匀于237nm 测定4min 内吸光值变化,记为△A 测定管.（从吸光值稳定增加开始计时） | ||
注意：空白管只需测定一次.
糜蛋白酶活性计算公式：
（1）按蛋白浓度计算
活性单位定义：25℃每毫克蛋白每分钟催化吸光值增加 1 为一个酶活单位.
糜蛋白酶 (U/mg prot) = (△A 测定管-△A 空白管)×V 反总÷(Cpr×V1)÷T = 2.75×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr
Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mg/mL）,需要另外测定；V1：加入反应体系中粗酶液体积（mL）,100μL=0.1
mL；V 反总：反应总体积,1100μL=1.1mL；T：反应时间（min）,4min.
（2）按样本质量计算
活性单位定义：25℃每克样品每分钟催化吸光值增加 1 为一个酶活单位.
糜蛋白酶 (U/g) = (△A 测定管-△A 空白管)×V 反总÷(W×V1÷V2)÷T = 2.75×(△A 测定管-△A 空 白管)÷W
注： W：样品质量（g）；V1：加入反应体系中粗酶液体积（mL）,100μL=0.1 mL；V2：粗酶 液总体积（mL）,1 mL；V 反总：反应总体积,1100μL=1.1mL；T：反应时间（min）,4min.
注意事项：
1. 测定前须先取 1～2 个样做预实验,使得吸光值在 5min 内程线性变化.测定过程操作须迅速.
2. AK131-B 试剂配制好后 3 天内使用完.
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