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客户咨询蔗糖磷酸合成酶(Sucrose phosphate synthase,SPS)试剂盒相关信息

发布时间:2025/3/28 11:30:58      阅读次数:44

       今天是25年3月28日,有客户咨询到蔗糖磷酸合成酶(Sucrose phosphate synthase,SPS)试剂盒的相关信息,包括这个试剂盒的测定原理,测定意义以及操作步骤等,具体的详细内容可以参考蔗糖磷酸合成酶(Sucrose phosphate synthase,SPS)试剂盒的说明书,说明书如下:
 

货号:GV-W-B505 规格:100 /48 

蔗糖磷酸合成酶(Sucrose phosphate synthase,SPS)试剂盒说明书

微量法

正式测定管前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义

蔗糖不仅是重要的光合产物,也是植物体内运输的主要物质,还是碳水化合物的贮存形式之一.SPS(EC 2.4.1.14)以果糖-6-磷酸为受体,形成的蔗糖磷酸在蔗糖磷酸酶的作用下形成蔗糖.一般把蔗糖磷酸酯合成酶-蔗糖磷酸酶系统看作是蔗糖合成的主要途径.

测定原理

蔗糖磷酸合成酶催化果糖-6-磷酸形成蔗糖磷酸,蔗糖磷酸与间苯二酚反应可呈现颜色变化,在480nm下有特征吸收峰,酶活力大小与颜色的深浅成正比.

需自备的的仪器和用品

可见分光光度计/酶标仪 水浴锅 离心机 移液器 微量石英比色皿/96孔板 研钵 冰

试剂的组成和配制

提取液:液体 100mL×1 ,4℃保存; 试剂一:液体 2.5mL×1 瓶,-20℃保存;

试剂二:1000μg/mL 蔗糖溶液 10mL×1 瓶,4℃保存; 试剂三:液体 2mL×1 瓶,4℃保存

试剂四:液体 25mL×1 瓶,4℃保存; 试剂五:液体 6mL×1 瓶,4℃保存;

样品测定的准备:

按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL 提取液),进行冰浴匀浆.8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测.

测定步骤

1 分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至480nm,蒸馏水调零.

2 样本测定(在 EP 管中依次加入下列试剂):

试剂名称(μL)

测定管

对照管

标准管

空白管

样本

10

10

 

 

蒸馏水

 

45

45

55

试剂二

 

 

10

 

试剂一

45

 

 

 

混匀,25℃准确水浴 10min

试剂三

15

15

15

15

沸水浴中煮沸 10min 左右(盖紧,以防止水分散失),冷却

试剂四

210

210

210

210

试剂五

60

60

60

60

混匀,沸水浴30min,冷却后,取200μL至微量石英比色皿或96孔板中,480nm下测定各管吸光


值.标准管和空白管只要做一管.每个测定管需要设一个对照管.

SPS 活力单位的计算

1 按照蛋白浓度计算

单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg蔗糖定义为一个酶活力单位.

SPS 活性(μg /min/mg prot)= {C 标准管×V1×A 测定管-A 对照管)÷A 标准管-A 空白管))÷(V1×Cpr)÷T=100×A 测定管-A 对照管)÷A 标准管-A 空白管)÷Cpr

2 按照样本鲜重计算

单位定义:每g组织每分钟催化产生1μg蔗糖定义为一个酶活力单位.

SPS 活性(μg /min/g 鲜重) = {C 标准管×V1×A 测定管-A 对照管)÷A 标准管-A 空白管))÷(W×V1÷V2)÷T=100×A 测定管-A 对照管)÷A 标准管-A 空白管)÷W

C 标准管:标准管浓度,1000μg/mL;V1:加入反应体系中样本体积,0.01mL; V2:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;T :反应时间:10min.

 


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