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发布时间：2025/3/28 11:43:35 阅读次数：30
非蛋白质巯基含量检测试剂盒说明书
货号：GV-FDSH-1-G
规格：100T/48S
微量法
| 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
| 提取液一 | 液体 30 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
| 提取液二 | 液体 30 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
| 试剂一 | 液体 30 mL×1 瓶 | 4℃保存 |
| 试剂二 | 粉剂×1 瓶 | 4℃保存 |
| 标准品 | 粉剂×1 支 | 4℃保存 |
溶液的配制：
1 提取液的配制：将提取液一和提取液二按体积比 1：1 的比例混合配制,按照样本数量配制并在当天用完；
2 试剂二：临用前加入 2 mL 无水甲醇充分溶解备用；
3 标准品：10 mg 半胱氨酸,临用前加入 1.65 mL 提取液溶解为 50 µmol/mL 的半胱氨酸标准溶液.
生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基.巯基化合物在体内具有重要的解毒功能,对生物体的自 我调节具有非常重要的生理意义.
巯基基团与5,5’-二硫代-双-硝基苯甲酸（DTNB）反应,生成黄色化合物,在412nm处有最大吸收峰.
最低检出限：0.0061 μmol/mL
线性范围：0.00625-0.8 μmol/mL
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪 离心机 恒温水浴锅 微量玻璃比色皿/96孔板 甲醇 研钵/匀浆器和蒸馏水.
一 样本处理（可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献）
1. 动物 植物组织：称取约 0.1g,加入 1mL 的提取液,制备成 10%的匀浆,10000g,常温离心 10min,取上清待测.
2. 细胞或细菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入
1mL 提取液）,超声波破碎细胞（功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min）然后 10000g,常温离心 10min, 取上清置冰上待测.
3. 血清（浆）,培养液：向 0.1mL 血清（浆）或培养液中加入 1mL 提取液,10000g,常温离心 10min,取上清待测.
1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至412nm,蒸馏水调零.
2. 标准品的制备：将50μmol/mL标准溶液用提取液稀释至0.4 0.2 0.1 0.05 0.025 0.0125 0.00625μmol/mL 的标准液,现用现配.
3. 操作表
|
| 对照管 | 测定管 | 标准管 | 空白管 |
| 上清液（μL） | 60 | 60 | - | - |
| 标准品（μL） | - | - | 60 | - |
| 试剂一（μL） | 130 | 130 | 130 | 130 |
| 试剂二（μL） | - | 20 | 20 | - |
| H2O（μL） | 20 |
|
| 80 |
| 混匀,室温放置 10min,吸取 200μL 于微量比色皿/96 孔板中测定 412nm 吸光值,分别记为 A 对 照 A 测定 A 标准 A 空白,计算ΔA 测定=A 测定-A 对照,算ΔA 标准=A 标准-A 空白. | ||||
1. 标准曲线的绘制：
以标准液浓度为x轴,ΔA标准为y轴,绘制标准曲线,得到标准方程y=kx+b,将ΔA测定代入公式得到x（μmol/mL）.
2. 非蛋白质巯基含量计算：
（1） 按样本质量计算
非蛋白质巯基含量（µmol/g 质量）=x×V提取÷W=x÷W
（2） 按血清 培养液体积计算
非蛋白质巯基含量（µmol/mL）=x×（V提取+V液体）÷V液体=11×x
（3） 按细胞数量计算
非蛋白质巯基含量（μmol/104 cell）=x×V提取÷500=0.002×x
V提取：加入提取液体积,1mL；W：样本质量,g；Cpr,样本蛋白浓度,mg/mL；500：500万个细胞；V
液体：血清（浆）或培养液体积,0.1mL.
如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定.
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