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湖南客户咨询人白蛋白（ALB）试剂盒操作步骤

发布时间：2025/11/27 16:41:43 阅读次数：4

        2025年11月27日下午,有客户咨询到人白蛋白（ALB）试剂盒的操作步骤和使用方法,本试剂盒用于体外定量检测血清血浆组织细胞上清及相关液体样本中人白蛋白（ALB）的含量.试剂盒的有效期为6个月,试剂盒的保存条件2-8℃

人白蛋白（ALB）试剂盒实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）.往预先包被人白蛋白（ALB）抗体的包被微孔中,依次加入标本标准品 HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤.用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色.颜色的深浅和样品中的人白蛋白（ALB）呈正相关.用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值）,计算样品浓度.

人白蛋白（ALB）试剂盒样本处理及要求
1.    血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融.
2.    血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8°C 1000g离心20分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融.
3.    细胞培养物上清或其它生物标本：1000g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融.
注：标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测.

需要而未提供的试剂和器材
1.   酶标仪（450nm）
2.   高精度加样器及枪头：0.5-10uL 2-20uL 20-200uL 200-1000uL 3.   37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水

试剂盒组成
名称                        96 孔配置        48 孔配置         备注
微孔酶标板          8 孔×12 条    8 孔×6 条               无
标准品                  0.3mL*6 管    0.3mL*6 管         无
样本稀释液                6mL       3mL                  无
检测抗体-HRP          10mL      5mL                  无
20×洗涤缓冲液            25mL          15mL    按说明书进行稀释
底物 A                         6mL                3mL                无
底物 B                   6mL              3mL                无
终止液                     6mL                3mL              无
封板膜                       2 张              2 张                 无
说明书                       1 份                1 份                 无
自封袋                         1 个               1 个                  无
备注：
1.    标准品浓度依次为：240 120 60 30 15 7.5 ng/mL
2.    经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取50μL样本上样即可.当有部分样本值超过最大标准品浓度时,可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验.

注意事项
1.    严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果.所有试剂都必须在使用前达到室温 20-25℃.使用后立即冷藏保存试剂.
2.    洗板不正确可以导致不准确的结果.在加入底物前确保尽量吸干孔内液体.温育过程中不要让微孔干燥掉.
3.    消除板底残留的液体和手指印,否则影响 OD 值.
4.    底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用.
5.    避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果.
6.    在储存和温育时避免强光直接照射.
7.    平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上.
8.    任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体.任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性.
9.    不能使用过期产品.
10. 如果可能传播疾病,所有的样品都应管理好,按照规定的程序处理样品和检测装置.

试剂准备
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用.
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释,即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水.

操作步骤
1.    从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃.
2.    设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL；
3.    样本孔中加入待测样本 50μL；空白孔不加.
4.    除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育 60min.
5.    弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液（350μL）,静置 1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）.
6.    每孔加入底物 A B 各 50μL,37℃避光孵育 15min.
7.    每孔加入终止液 50μL,15min 内,在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值.

实验结果计算
以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度.

试剂盒性能
1.   检测范围：7.5 ng/mL — 240 ng/mL.
2.   灵敏度：最低检测浓度小于 1.0 ng/mL.
3.   特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应.
4.   重复性：板内板间变异系数均小于 15%.