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关于贴壁细胞接收后的处理说明

发布时间：2026/4/17 14:02:24 阅读次数：88

贴壁细胞接收后的处理
1）收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-4h,若发现培养瓶破损有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们
2）静置完成后,请在显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照（10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据.

贴壁细胞：
细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况.若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养.若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理.传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收.
备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞.收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 .

贴壁细胞的复苏传代冻存步骤
贴壁细胞复苏：
从液氮灌中或-80℃冰箱中查找到需要复苏的细胞,水浴锅提前打开预热 37℃.
1) 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2) 加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀.
3) 弃去上清液,完全培养基重悬细胞.然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基接种于 T25 培养瓶中（或 6cm 皿中）,培养过夜,第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度.

贴壁细胞传代：
如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养.
1) 弃去培养上清,用不含钙镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次；
2) 加 1-2mL 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中,置于 37℃培养箱中消化 2-3min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后,加 5ml 以上含 10%血清的完全培养基终止消化；
3) 轻轻吹打细胞,完全脱落后吸出至离心管中,1000rpm离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL完全培养基后吹匀；
4) 按 5-6mL/瓶补加完全培养基,将细胞悬液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 6-8mL完全培养基的培养皿中或者培养瓶中.（首次传代两个T25或者两个6cm的皿）

贴壁细胞冻存：
1）细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度.一般细胞的推荐冻存密度为1×10 6~1×107个活细胞/ml;
2）1000rpm离心3-5min,去掉上清.用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称代数日期等信息;
3）按冻存数量加入无血清冻存液后直接放-80℃冰箱过夜,后续可转入液氮罐中长期保存.