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发布时间:2026/4/17 14:02:57 阅读次数:97
悬浮细胞接收后的处理
1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-4h,若发现培养瓶破损 有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们
2)静置完成后,请在显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据.
悬浮细胞:
T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟,弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中. (加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基).
备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞.收到细胞后第
一次传代建议T25培养瓶1:2传代 .
悬浮细胞的复苏 传代 冻存步骤
悬浮细胞复苏:
从液氮灌中或-80℃冰箱中查找到需要复苏的细胞,水浴锅提前打开预热 37℃.
1. 复苏细胞:从液氮灌中或-80℃冰箱中查找到需要复苏的细胞,水浴锅提前打开预热 37℃;
1) 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻; 2) 加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀;
3) 弃去上清液,完全培养基重悬细胞.然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基接种于 T25 培养瓶中(或 6cm 皿中),培养过夜,第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度.
悬浮细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养.
方法一:将细胞悬液收集到离心管中1000rpm,离心5min,弃去上清,补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力.
方法二:1) 半换液处理,竖着培养瓶在培养箱静置 10-20min 左右,肉眼可见大部分细胞沉在底部;
2) 轻轻吸掉 3ml 左右培养基,将剩余细胞悬起混匀;
3) 将细胞悬液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 5-6 mL 完全培养基的培养皿中或者培养瓶中,一般这样传代 3 次左右可以离心传代一次
悬浮细胞冻存:
1)收集瓶内所有细胞悬液吸至离心管,如悬浮细胞贴壁需要把贴壁的细胞吹下来一起收集离心,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度.一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml;
2)1000rpm离心3-5min,去掉上清.用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称 代数 日期等信息;
3)按冻存数量加入无血清冻存液后直接放-80℃冰箱过夜,后续可转入液氮罐中长期保存.
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