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关于半贴细胞和贴壁不牢（悬浮）细胞接收后的处理说明

发布时间：2026/4/17 14:03:23 阅读次数：84

半贴细胞和贴壁不牢（悬浮）细胞接收后的处理
1）收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-4h,若发现培养瓶破损有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们
2）静置完成后,请在显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照（10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据.

半贴细胞和贴壁不牢（悬浮）细胞：
T25瓶置于37℃培养箱中约2-3h,显微镜下观察细胞的情况,若细胞密度在60%以下,客户需收集T25瓶中的悬浮细胞离心后用完全培养基重悬后打回到原培养瓶中继续培养,若细胞生长70%-90%对细胞进行传代,传代时需要收集培养基中悬浮的细胞离心后回收.
备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞.收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 .

半贴细胞和贴壁不牢（悬浮）细胞的复苏传代冻存步骤
复苏细胞：
从液氮灌中或-80℃冰箱中查找到需要复苏的细胞,水浴锅提前打开预热 37℃.
1) 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻；
2) 加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀；
3) 弃去上清液,完全培养基重悬细胞.然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基接种于 T25培养瓶中（或 6cm 皿中）,培养过夜,第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度；
2. 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养.

细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养.
1) 将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中；
2) 贴壁细胞用不含钙镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次,由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中；
3) 加 1-2mL 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中,置于 37℃培养箱中消化 2-3min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后,加 5ml 以上含 10%血清的完全培养基终止消化；
3) 将收集到的悬浮细胞 pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞1000rpml离心5min,弃去上清,补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力.（即 1 个 T25 传代接种至 2~3 个 T25 或者 2~3 个直径为6cm 的培养皿）.

细胞冻存：
1）细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度.一般细胞的推荐冻存密度为1×10^6~1×107个活细胞/ml；
2）1000rpm离心3-5min,去掉上清.用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×10^6~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称代数日期等信息；
3）按冻存数量加入无血清冻存液后直接放-80℃冰箱过夜,后续可转入液氮罐中长期保存.