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热门关键词：白介素 gibco ELISA试剂盒胎牛血清移液器 ※本公司产品仅供科研实验研究使用，不用于临床诊断 !

Elisa试剂盒简介

产品名称：扁豆凝集素(LCA)ELISA检测试剂盒

目录编号：JW.PL1002

商品品牌：极威生物

产品规格：48T/96T

保存温度：2-8℃

方法学：酶联免疫法

计量单位：盒

保质期：6个月

是否提供代测：是

是否提供试用：否

检测样本：血清/血浆/细胞上清液/组织匀浆等

产品用途：仅供科研使用，不得用于其他用途

ELISA实验样品收集、处理及保存方法

1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

Elisa实验自备物品

1.酶标仪（450nm）

2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

扁豆凝集素(LCA)ELISA检测试剂盒操作步骤

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；

4.随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

扁豆凝集素(LCA)ELISA检测试剂盒操作注意事项

1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。

2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.预处理后的样本无需稀释，直接取10μL加样即可。

4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.所有液体组分使用前充分摇匀。

Elisa实验结果判断

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

免责声明

1.试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

2.严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。

Elisa试剂盒实验常见问题分析：

问题一：高背景或阴性对照值偏高

可能原因	建议
阴性对照孔被阳性对照或样品污染	洗涤时，勿将洗液溢出孔外。
洗涤不充分	确保在洗涤时每个孔都充满了液体，确保将残余液体从孔中移除。
酶结合物过浓	请检查酶结合物是否按说明书规定稀释
孵育温度过高	检查孵育箱的温度是否正确、稳定
底物在使用前曝光	应保存在暗处，避光。
读板前停留时间过长	加终止液后 3 分钟内读数

问题二：阳性对照值偏低或低吸光度

可能原因	建议
试剂未平衡至室温	开始实验前，将试剂盒平衡至室温
包袋中有湿气	首次开袋标上日期，封好未使用的孔条，放入干燥剂。
样本中有抑制剂	叠氮化钠抑制HRP 的活性
试剂在使用前未混匀	使用前混匀试剂
洗涤步骤过于剧烈	降低洗涤系统的压力
实验开始后，微孔变干燥	实验过程勿中断，应连续完成所有的实验步骤。
检测体积偏小	确保移液器已校正

问题三：边缘效应

可能原因	建议
蒸发	各步之间，须使用封版胶密封反应板。
温度不均匀	校准孵育箱，勿叠放反应板。

问题四：标准曲线不佳

可能原因	建议
倍比稀释标准品时未混匀	稀释标准品的每一步均需混匀
过早稀释	标准品在快要使用时稀释
加入的体积不正确	使用校准过的移液器，快速、等量的将标准品分配到各个微孔中。

问题五：标准曲线良好，但样本无检测信号

可能原因	建议
样本中无检测物或检测物含量极低	设置内参，重新实验
样本中其他物质影响/ 掩盖检测	作适当稀释，降低其他物质的干扰，或作系列稀释，检测回收率。
样本中检测物浓度过高，Hook 效应导致假低值	适当倍数稀释样本，检测物浓度尽量在试剂盒检测范围内。

问题六：重复性较差

可能原因	建议
微孔中有气泡	用针尖挑破气泡
试剂未混匀	确保充分混匀试剂
样本中有杂质或沉淀物	使用前离心
微孔包被面被吸头划破	加液时小心操作
使用用过的封板胶纸	每次须使用新的封板胶封住反应孔